消化道的白念珠菌感染與脾虛的相關(guān)性及其免疫學(xué)機(jī)制研究.pdf

1、目的：探討小鼠在脾虛狀態(tài)下對(duì)消化道感染白念珠菌的易感性及其免疫學(xué)機(jī)制。闡明脾虛小鼠對(duì)白念珠菌易感性的變化特點(diǎn)，以進(jìn)一步控制其感染；明確脾虛小鼠感染白念珠菌前后某些免疫功能的變化及其與白念珠菌感染的關(guān)系；明確脾虛證易并發(fā)白念珠菌感染的免疫學(xué)機(jī)制，為臨床防治白念珠菌感染和脾虛證提供一定的理論依據(jù)。
　　 材料與方法：本實(shí)驗(yàn)將小鼠分層隨機(jī)分成四組，即正常對(duì)照組（A組）、脾虛模型組（B組）、正常感染白念珠菌組（C組）、脾虛感染白念珠菌組

2、（D組）。采用飲食失節(jié)加勞倦過度的復(fù)合因素制備小鼠脾虛證模型。模型成功后，經(jīng)口灌給C、D組小鼠白念珠菌懸液，之后連續(xù)3周，觀察各組小鼠的體重變化及一般狀況的改變，記錄并計(jì)算平均生存天數(shù)及存活率，并檢測(cè)糞便及腎臟中的活白念珠菌的數(shù)量，測(cè)定小鼠脾指數(shù)及胸腺指數(shù)。取小鼠空腸作HE染色觀察小鼠小腸黏膜形態(tài)的病理學(xué)改變，電鏡觀察小腸超微結(jié)構(gòu)的變化。應(yīng)用動(dòng)物血液分析儀檢測(cè)小鼠外周血中白細(xì)胞總數(shù)、中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞數(shù)及單核細(xì)胞數(shù)，并測(cè)定紅細(xì)胞數(shù)及血

3、紅蛋白含量的改變；應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測(cè)定脾虛模型小鼠腸組織表達(dá)的免疫球蛋白A（IgA）、血清中白細(xì)胞介素1β（IL-1β）、腹腔巨噬細(xì)胞腫瘤壞死因子α（TNF-α）、脾細(xì)胞γ-干擾素（IFN-γ）及白細(xì)胞介素10（IL-10）的含量。應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄/聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）方法檢測(cè)腸組織局部IFN-γmRNA和IL-10mRNA的表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：
　　 1．白念珠菌消化道感染對(duì)脾虛小鼠體重及一般狀

4、況的影響
　　 脾虛小鼠比正常小鼠體重明顯減輕，且一般狀況欠佳。正常小鼠感染后體重?zé)o明顯變化，而脾虛感染組小鼠的體重下降明顯。
　　 2．白念珠菌消化道感染對(duì)脾虛小鼠生存天數(shù)及生存率的影響
　　 脾虛小鼠平均生存天數(shù)縮短，生存率下降至75％；正常小鼠感染白念珠菌后，平均生存天數(shù)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而脾虛小鼠感染后平均生存天數(shù)明顯縮短，生存率下降至55％。
　　 3．白念珠菌消化道感染對(duì)脾虛小鼠糞便活菌數(shù)的影響<

5、br>　　 正常小鼠感染后，便活菌數(shù)呈先增高后減少的趨勢(shì)，而脾虛小鼠感染后則呈逐漸增高趨勢(shì)，并始終高于前者。在感染后第6天，兩組小鼠的便活菌數(shù)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；感染后第9天、第12天、第15天及第18天，統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著。
　　 4．白念珠菌消化道感染對(duì)脾虛小鼠腎臟內(nèi)活菌數(shù)的影響
　　 正常小鼠感染后，腎臟內(nèi)活菌數(shù)相對(duì)較少，而脾虛小鼠感染后腎臟內(nèi)活菌數(shù)明顯增加。
　　 5．白念珠菌消化道感染對(duì)脾虛小鼠脾指數(shù)及胸腺指數(shù)

6、的影響
　　 脾虛小鼠的脾臟及胸腺重量均低于正常小鼠，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。小鼠感染白念珠菌后期，脾指數(shù)及胸腺指數(shù)均明顯增高，統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著，尤其是脾虛小鼠脾臟重量增加更為明顯。
　　 6．白念珠菌消化道感染對(duì)脾虛小鼠小腸黏膜形態(tài)學(xué)的影響
　　 脾虛組小鼠小腸絨毛略變短，游離面上皮松散。正常小鼠感染后期，小腸絨毛變短且稀疏，游離面上皮立方形改變，固有膜空泡樣改變，細(xì)胞輕度水腫。脾虛感染組小腸絨毛稀疏不完整，柱狀上皮立方

7、形改變，固有膜空泡樣改變。
　　 7．白念珠菌消化道感染對(duì)脾虛小鼠小腸黏膜超微結(jié)構(gòu)的影響
　　 正常小鼠感染后期，微絨毛較細(xì)疏且長(zhǎng)短大小不一，胞質(zhì)內(nèi)線粒體稍腫脹，嵴較松散，部分星空泡樣改變。脾虛感染組小鼠小腸微絨毛短少且不整齊，線粒體腫脹，嵴斷裂消失，星空泡樣改變，并可見內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張、核糖體脫落等。
　　 8．白念珠菌消化道感染對(duì)脾虛小鼠外周血細(xì)胞數(shù)量的影響
　　 脾虛小鼠外周血中紅細(xì)胞數(shù)及血紅蛋白含量均有

8、所降低，尤其是感染后期的脾虛小鼠下降更加明顯。感染后小鼠體內(nèi)白細(xì)胞數(shù)量增多，正常小鼠感染后期，淋巴細(xì)胞數(shù)明顯增高；而脾虛小鼠感染后期，單核細(xì)胞數(shù)增高明顯，中性粒細(xì)胞也明顯增加。
　　 9．白念珠菌消化道感染對(duì)脾虛小鼠腹腔巨噬細(xì)胞分泌TNF-α的影響
　　 與正常組比較，脾虛組小鼠腹腔巨噬細(xì)胞TNF-α的分泌減少，而正常小鼠感染后期TNF-α的分泌增多，二者均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；脾虛感染組小鼠TNF-α的分泌則明顯高于其它各組。

9、
　　 10．白念珠菌消化道感染對(duì)脾虛小鼠血清中IL-1β含量的影響
　　 脾虛小鼠血清中IL-1β含量無(wú)明顯改變；正常小鼠感染后期，IL-1β含量雖有增多，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；脾虛小鼠感染后期，IL-1β含量則明顯升高。
　　 11．白念珠菌消化道感染對(duì)脾虛小鼠小腸組織IgA含量的影響
　　 脾虛小鼠比正常小鼠小腸組織IgA含量減少，差異顯著；小鼠感染后期，腸組織IgA分泌也呈下降趨勢(shì)，特別是脾虛感染組小鼠

10、IgA含量明顯低于其它各組。
　　 12．白念珠菌消化道感染對(duì)脾虛小鼠脾臟IFN-γ和IL-10表達(dá)的影響
　　 正常小鼠感染后表達(dá)IFN-γ和IL-10的水平均高于正常組，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；而脾虛小鼠感染白念珠菌后期，則顯著高于其它各組。
　　 13．白念珠菌消化道感染對(duì)脾虛小鼠腸組織中IFN-γ mRNA及IL-10mRNA表達(dá)的影響
　　 與正常組比較，脾虛組小鼠IFN-γmRNA表達(dá)增高，IL-10

11、mRNA差異不明顯；與脾虛組比較，正常與脾虛小鼠感染后腸組織表達(dá)IFN-γ mRNA和IL-10mRNA的水平均顯著升高。與正常感染白念珠菌組比較，脾虛小鼠感染后期IFN-γmRNA的表達(dá)水平仍處于高水平狀態(tài)，有顯著性差異，但I(xiàn)L-10mRNA表達(dá)減少。
　　 結(jié)論：
　　 1．小鼠在脾虛狀態(tài)下對(duì)消化道感染白念珠菌的易感性增強(qiáng)?？墒蛊⑻撔∈篌w重顯著下降，脾指數(shù)及胸腺指數(shù)明顯增高，還可以使平均生存天數(shù)明顯縮短，生存率大幅度

12、下降，而且便活菌數(shù)持續(xù)增高，腎臟內(nèi)活菌數(shù)也顯著增加。
　　 2．小鼠在脾虛狀態(tài)下消化道感染白念珠菌后，導(dǎo)致小腸組織IgA含量明顯減少，削弱了消化道局部免疫防御功能。更容易加重小腸黏膜形態(tài)學(xué)改變及小腸上皮細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的病理變化。還可入血播散至其它部位，造成外周血中紅細(xì)胞數(shù)量減少，血紅蛋白含量降低，體內(nèi)炎性細(xì)胞大量增殖。
　　 3．消化道的白念珠菌感染是否致病與小鼠的免疫力密切相關(guān)，尤其是在免疫功能低下時(shí)危害更大，同時(shí)又進(jìn)一