PTAT-XIAP對AD病模型大鼠行為及神經(jīng)元氧化應(yīng)激損傷的影響.pdf

1、目的:聯(lián)合應(yīng)用Aβ(25-35)和D-半乳糖構(gòu)建AD大鼠模型,研究XIAP在AD大鼠模型神經(jīng)元表達(dá)的變化,以及PTAT-XIAP融合蛋白對Aβ(25-35)所致神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響及分子機(jī)制。
　　方法:采用Morris水迷宮法對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行篩選,將逃避潛伏期少于120s的大鼠40只用于實(shí)驗(yàn),隨機(jī)分為四組,每組10只。Aβ模型組:用腦立體定位儀定位,每側(cè)海馬內(nèi)注射Aβ(25-35)2μL(5g/L);Aβ聯(lián)合D-半乳糖復(fù)合模型組:按

2、Aβ模型組的方法雙側(cè)海馬注射Aβ,在Aβ注射前28天開始,每天腹腔注射D-半乳糖一次(50mg/kg/d),連續(xù)42天;Aβ模型治療組:海馬注射 Aβ(25-35)后第5周開始經(jīng)尾靜脈注射TAT-XIAP融合蛋白(10mg/kg),每周兩次,連續(xù)4周,Aβ模型組尾靜脈注射等量生理鹽水作為藥物注射對照。對照組:雙側(cè)海馬注射等量生理鹽水。模型建立后(Aβ注射后)第8周,通過進(jìn)行水迷宮實(shí)驗(yàn)觀察 AD模型大鼠行為及學(xué)習(xí)記憶能力的變化,水迷宮實(shí)驗(yàn)

3、結(jié)束后取眼球血、海馬和大腦皮質(zhì)。
　　用羥胺法、比色法檢測大鼠血清總超氧化物歧化酶(TSOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)、丙二醛(MDA)的含量;用RT-PCR方法檢測 AD模型大鼠海馬及皮質(zhì)半胱天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)mRNA、XIAP mRNA的表達(dá)情況;制作腦組織石蠟包埋切片,做HE染色了解 AD大鼠模型神經(jīng)元的結(jié)構(gòu)變化,做免疫組織化學(xué),研究Caspase-3蛋白在AD大鼠模型神經(jīng)元的表達(dá)。應(yīng)用SP

4、SS18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,以P﹤0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:1、行為變化:Aβ(25-35)與 D-半乳糖復(fù)合老年性癡呆模型大鼠較正常對照組大鼠活動(dòng)及打斗減少,而復(fù)合模型組大鼠較 Aβ(25-35)組行為變化更為明顯。2、Morris水迷宮游泳結(jié)果顯示,大鼠搜索并找到安全平臺的逃避潛伏期及游泳路線各組間有顯著差異。3、HE染色結(jié)果顯示, Aβ模型組、復(fù)合模型組的海馬及皮質(zhì)神經(jīng)元細(xì)胞較對照組受損嚴(yán)重;復(fù)合模型組

5、大鼠較Aβ(25-35)組海馬及皮質(zhì)神經(jīng)元細(xì)胞受損顯著;PTAT-XIAP治療組的海馬及皮質(zhì)神經(jīng)元細(xì)胞較Aβ模型組受損減輕,細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)相對正常。4、免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示,Aβ模型組、復(fù)合模型組的 Caspase-3蛋白活性較對照組增強(qiáng);復(fù)合模型組的Caspase-3蛋白活性較Aβ(25-35)組增強(qiáng)顯著;PTAT- XIAP治療組的Caspase-3蛋白活性較Aβ模型組降低。5、RT-PCR結(jié)果顯示,Aβ模型組、復(fù)合模型組與對照組比較

6、,各模型組大鼠海馬及皮質(zhì)組織XIAP mRNA水平顯著降低,而Caspase-3mRNA水平有明顯的上調(diào);復(fù)合模型組與Aβ模型組比較,海馬及皮質(zhì)組織XIAP mRNA水平顯著降低,而Caspase-3mRNA水平上調(diào)明顯。6、血清TSOD、GSH-PX、MDA檢測結(jié)果顯示,Aβ模型組、復(fù)合模型組TSOD、GSH-Px活力較對照組降低,而MDA含量較對照組提高;復(fù)合模型組的TSOD、GSH-Px活力較Aβ模型組顯著降低,MDA含量較Aβ模

7、型組顯著提高;PTAT- XIAP治療組的 TSOD、GSH-Px活力較Aβ模型組顯著提高,而MDA含量較Aβ模型組顯著降低,差異有顯著性。
　　結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)成功地復(fù)制了Alzheimer病大鼠動(dòng)物模型,且D-半乳糖協(xié)同Aβ(25-35)構(gòu)建的AD復(fù)合模型較單純海馬內(nèi)注射Aβ(25-35)模型能更好地復(fù)制出AD疾病模型;Aβ(25-35)可抑制XIAP,提高Caspase-3 mRNA的表達(dá),活化Caspase-3,可降低AD大鼠