高血壓病患者中醫(yī)證候的血清蛋白質(zhì)組學(xué)差異表達(dá)研究.pdf

1、背景:高血壓病(Essential Hypertension,EH)是最常見(jiàn)的心血管疾病,以體循環(huán)動(dòng)脈壓增高為主要表現(xiàn)的臨床綜合征,占高血壓患者的95％以上。同時(shí),又是一種危險(xiǎn)因素,與冠心病、腦卒中、心力衰竭和腎功能障礙密切相關(guān),是導(dǎo)致心腦血管疾病死亡的主要危險(xiǎn)因素之一。發(fā)病機(jī)制不明確,可能與交感神經(jīng)活性亢進(jìn)、腎素.血管緊張素.醛固酮系統(tǒng)過(guò)度激活、潴鈉和排鈉系統(tǒng)異常、胰島素抵抗、血管重建、內(nèi)皮細(xì)胞功能受損等因素相關(guān)。中醫(yī)認(rèn)為:其形成是一

2、個(gè)長(zhǎng)期的過(guò)程,由體質(zhì)、情志、飲食、勞逸等多種因素交互作用所致。體質(zhì)的陰陽(yáng)偏盛或偏衰、稟賦不足、臟腑虧損為發(fā)病的內(nèi)因；過(guò)度的精神緊張、情志的異常、飲食的偏嗜是發(fā)病的常見(jiàn)外因。病機(jī)根本為肝、脾、腎陰陽(yáng)失調(diào)、運(yùn)化失施,日久津血運(yùn)行不暢,痰濕阻滯,脈絡(luò)不利；或暗耗津血,營(yíng)血受損,血脈瘀滯；或陰陽(yáng)兩虛,痰瘀痹阻,橫竄經(jīng)隧,并最終累及他臟發(fā)展成為胸痹、中風(fēng)、昏厥等變證。目前不管是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)還是傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)對(duì)其發(fā)病因?yàn)槎疾幻鞔_。蛋白質(zhì)組學(xué)的出現(xiàn),在探討EH

3、的發(fā)病機(jī)理、深入研究中醫(yī)證候的本質(zhì)、豐富中醫(yī)辨證的手段等諸多方面,日益顯現(xiàn)出其重要作用。
　　 目的:研究EH中醫(yī)不同證候患者血清蛋白質(zhì)組學(xué)表達(dá)的差異,篩選EH不同中醫(yī)證候特異蛋白標(biāo)志物,尋找中醫(yī)辨證的客觀(guān)指標(biāo)。
　　 方法:對(duì)EH患者進(jìn)行辨證分型,最后納入EH肝膽濕熱證(GDSR)40例、痰濕壅盛證(TSYS)40例、陰虛陽(yáng)亢證(YXYK)15例,并隨機(jī)選擇健康體檢人員(Health)39例。對(duì)所有入選人員血清蛋白質(zhì)組

4、學(xué)進(jìn)行質(zhì)譜分析(基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜MALDI-TOF-MS)。進(jìn)一步運(yùn)用Proteinchip Software3.2.0&Biomarker PatternsTM Software5.0(BPS)軟件對(duì)圖譜進(jìn)行分析,對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行篩選、建立決策模型。
　　 結(jié)果:
　　 1.所有入選的EH患者血清蛋白質(zhì)譜與Health組比較共發(fā)現(xiàn)179個(gè)差異蛋白峰(P<0.05),其中20個(gè)表達(dá)增高,表達(dá)降低的159個(gè)。進(jìn)一

5、步篩選時(shí)發(fā)現(xiàn):分子量為4175.258m/z的蛋白峰在EH組中均呈現(xiàn)低水平表達(dá),以相對(duì)強(qiáng)度值6.116為分界線(xiàn),EH患者表達(dá)均在分界線(xiàn)以下,健康人表達(dá)均在分界線(xiàn)以上,可將所有EH患者血清質(zhì)譜與健康人質(zhì)譜完全區(qū)分開(kāi)來(lái)。
　　 2.GDSR組血清蛋白質(zhì)譜與Health組比較共發(fā)現(xiàn)182個(gè)差異蛋白峰(P<0.05),其中23個(gè)表達(dá)增高,表達(dá)降低的159個(gè)。
　　 3.TSYS組血清蛋白質(zhì)譜與Health組比較共發(fā)現(xiàn)168個(gè)差異

6、蛋白峰(P<0.05),其中15個(gè)表達(dá)增高,表達(dá)降低的153個(gè)。
　　 4.YXYK組血清蛋白質(zhì)譜與Health組比較共發(fā)現(xiàn)124個(gè)差異蛋白峰(P<0.05),其中7個(gè)表達(dá)增高,表達(dá)降低的117個(gè)。
　　 5.GDSR組與TSYS組蛋白質(zhì)譜比較兩組間有差異的蛋白質(zhì)峰有46個(gè)(P<0.05),其中GDSR組較TSYS組表達(dá)增高的有14個(gè),表達(dá)降低的32個(gè)。
　　 6.GDSR組與YXYK組蛋白質(zhì)譜比較發(fā)現(xiàn)有差異的蛋

7、白質(zhì)峰有72個(gè)(P<0.05),GDSR組較YXYK組表達(dá)增高的有26個(gè),表達(dá)降低的46個(gè)。
　　 7.TSYS組與YXYK組蛋白質(zhì)譜比較發(fā)現(xiàn)兩組間有差異的蛋白質(zhì)峰有22個(gè)(P<0.05),TSYS組較YXYK組表達(dá)增高的有3個(gè),表達(dá)降低的19個(gè)。
　　 8.BPS軟件篩選GDSR證的最佳標(biāo)志物。結(jié)果m/z為2487.19,9334.95,2238.14,6624.36,5903.54的5個(gè)蛋白峰為GDSR證的最佳標(biāo)志物

8、。這5個(gè)蛋白標(biāo)志物組成的訓(xùn)練模型能很好的將GDSR證區(qū)分出來(lái),該模型的敏感性Sensitive=86.667％,特異性Specificty=96.552％,假陽(yáng)性率False positive rate=3.448％,假陰性率False negative rate=13.333％,Youden's index=83.219％
　　 9.BPS軟件篩選TSYS證的最佳標(biāo)志物。結(jié)果顯示m/z為3161.26,7922.98,7555

9、.76,8030.79,3936.31的5個(gè)蛋白峰為T(mén)SYS證的最佳標(biāo)志物,這5個(gè)蛋白標(biāo)志物組成的訓(xùn)練模型能很好的將TSYS證區(qū)分出來(lái),其敏感性Sensitive=96.552％,特異性Specificty=83.333％,假陽(yáng)性率False positive rate=16.667％,假陰性率False negative rate=3.448％,Youden's index=79.885％
　　 結(jié)論:
　　 1.EH

10、患者與健康人血清蛋白質(zhì)譜之間差異蛋白峰所代表的蛋白質(zhì)或多肽可能是EH發(fā)病相關(guān)蛋白。對(duì)其進(jìn)行進(jìn)一步分離與鑒定對(duì)揭示EH發(fā)病機(jī)制至關(guān)重要。
　　 2.不同證候患者之間血清蛋白質(zhì)譜中差異表達(dá)的蛋白峰,可能是其證候外在表現(xiàn)的內(nèi)在物質(zhì)基礎(chǔ)。對(duì)差異蛋白的鑒定及功能的確定有望揭示中醫(yī)證候的本質(zhì)。
　　 3.GDSR證和TSYS證特異蛋白標(biāo)記物的篩選及證候模型的建立,在分子生物層面上為GDSR證和TSYS證的蛋白組學(xué)表達(dá)確立了客觀(guān)標(biāo)志。