不同劑量橄欖油對大鼠血膽固醇水平的影響及其機制研究.pdf

1、隨著經(jīng)濟的發(fā)展和人們生活方式的改變，心腦血管疾病已經(jīng)成為嚴重危害人們健康的疾病之一。心腦血管疾病的病因目前尚不完全清楚，但血脂異常特別是高膽固醇血癥是導(dǎo)致心腦血管疾病發(fā)生發(fā)展的主要危險因素已經(jīng)得到了大多數(shù)研究的支持，所以維持正常的血脂水平顯得尤為重要而且迫切。 肝臟在調(diào)節(jié)機體膽固醇平衡中發(fā)揮著重要作用。首先，3-羥-3-甲基戊二酸單酰輔酶A還原酶( hepatic3-hydroxy-3-methylglutaryl-coenzy

2、me A，HMG-CoAreductase)是膽固醇合成的限速酶。其次，膽固醇在肝中轉(zhuǎn)化為膽汁酸是其在體內(nèi)代謝的主要去路，而膽固醇7α-羥化酶(Cholesterol7α-Hydroxylase，CYP7A1)是調(diào)節(jié)膽汁酸合成的限速酶，所以這兩個酶在維持機體膽固醇的內(nèi)穩(wěn)態(tài)中起重要作用。本研究擬采用不同劑量的橄欖油替代高脂飼料中相應(yīng)比例的豬油，觀察對大鼠血膽固醇水平、肝臟中HMG-CoA reductase mRNA和CYP7A1mRNA

3、表達量的影響，研究橄欖油是否能通過在轉(zhuǎn)錄水平調(diào)節(jié)這兩個基因的表達而影響血膽固醇水平，以求闡明橄欖油對大鼠血膽固醇水平影響的機制，為指導(dǎo)居民合理膳食，預(yù)防營養(yǎng)相關(guān)的慢性病提供科學(xué)依據(jù)。 材料與方法： 一、動物分組 選擇45只健康雄性Wistar大鼠，體重100g-135g。適應(yīng)性飼養(yǎng)1w后，按體重隨機分為5組(每組9只)：基礎(chǔ)對照組(基礎(chǔ)組)，豬油對照組(豬油組)，橄欖油低劑量組(橄欖油Ⅰ組)，橄欖油中劑量組(橄欖

4、油Ⅱ組)，橄欖油高劑量組(橄欖油Ⅲ組)。基礎(chǔ)組喂基礎(chǔ)飼料，豬油組喂豬油高脂飼料(83.75％的基礎(chǔ)飼料，15％豬油，0.25％膽鹽，1％膽固醇)。各橄欖油干預(yù)組的飼料分別用6％、10％、15％的橄欖油代替豬油高脂飼料中相同比例的豬油，干預(yù)8W。 二、樣品采集 實驗結(jié)束時，對大鼠進行稱重；禁食12h后，在乙醚麻醉下，由腹主動脈采血，分離血清；同時分離肝臟及雙側(cè)腎周、附睪周圍和腸系膜等處脂肪，分別稱重記錄。 三、指標(biāo)

5、分析 (1)血脂測定：按試劑盒說明，在ECOM-F6124半自動生化分析儀(德國Eppendorf)上測定血清中總膽固醇(Total cholesterol，TC)、低密度脂蛋白-膽固醇(low density lipoprotein-cholesterol，LDL-C)、甘油三酯(triglycerides，TG)、高密度脂蛋白-膽固醇(high density lipoprotein-cholesterol，HDL-C)。

6、 (2)觀察各組大鼠肝臟病理改變：觀察各組大鼠肝臟的形態(tài)、質(zhì)地及色澤的改變；取小塊肝組織放入10％中性甲醛中固定，常規(guī)石蠟包埋，切片，HE染色，光鏡下觀察大鼠肝組織病理學(xué)改變。 (3)計算肝指數(shù)和臟器周圍脂肪/體重比值 ①肝指數(shù)(％)=肝重(g)/體重(g)×100； ②腎周脂肪重/體重比值(％)=雙側(cè)腎周脂肪重(g)/體重(g)×100； ③睪丸周圍脂肪重/體重比值(％)=雙側(cè)睪丸周圍脂肪重(g)

7、/體重(g)×100； ④腸系膜脂肪重/體重比值(％)=腸系膜脂肪墊重(g)/體重(g)×100； ⑤總脂肪重/體重比值(％)=[雙側(cè)腎臟周圍脂肪重(g)+雙側(cè)附睪周圍脂肪重(g)+腸系膜脂肪墊重(g)]/體重(g)×100； (4)肝臟中HMG-CoA reductase mRNA和CYP7A1 mRNA表達量的測定：將保存于-70℃冰箱中的肝組織取出，按Takara RT-PCR試劑盒說明擴增各組大鼠肝臟中H

8、MG-CoA reductase mRNA和CYP7A1 mRNA。逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)條件為：30℃10min，42℃30min，99℃5min，5℃5min。擴增反應(yīng)條件為：94℃2min；94℃30sec，54℃30sec，72℃1min，31個循環(huán)；再在72℃延伸lOmin。PCR產(chǎn)物經(jīng)2％瓊脂糖凝膠電泳，在電泳凝膠成像分析儀上照相，以各目標(biāo)產(chǎn)物灰度值×面積與GAPDH產(chǎn)物的灰度值×面積的比值表示該指標(biāo)的相對表達量。 四、統(tǒng)計分析

9、 實驗結(jié)果用-x±s表示，用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行單因素方差分析，組間兩兩比較用LSD法，檢驗水準α=0.05。 結(jié)果： 一、各組大鼠一般狀況及體重變化 實驗期間，除橄欖油Ⅱ組有一只大鼠死亡外，其余各組大鼠生長發(fā)育基本正常，未見異常表現(xiàn)。各組大鼠體重增量、攝食量和飼料效價間的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。 二、各組大鼠血脂水平 比較各組大鼠血TC、LDL-C水平，均以橄欖油Ⅲ組

10、最高。在TC水平上，豬油組、橄欖油Ⅰ組、橄欖油Ⅱ組、橄欖油Ⅲ組均明顯高于基礎(chǔ)組(P<0.05)；橄欖油Ⅱ組、橄欖油Ⅲ組的LDL-C水平也明顯高于基礎(chǔ)組(P<0.05)，橄欖油Ⅲ組LDL-C水平還高于豬油組(P<0.05)。比較各組HDL-C水平，橄欖油Ⅱ組、橄欖油Ⅲ組低于基礎(chǔ)組(P<0.05)，橄欖油III組低于豬油組(P<0.05)。在TG水平上，以橄欖油Ⅱ組最高，與基礎(chǔ)組的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。 三、各組大鼠肝

11、指數(shù)和內(nèi)臟脂肪/體重比值 與基礎(chǔ)組比較，其他各組大鼠肝指數(shù)均有升高(P<0.05)；橄欖油Ⅲ組大鼠各部位脂肪體比均低于其他各組，但其間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；橄欖油Ⅰ組、Ⅱ組大鼠睪周脂肪/體重、腸系膜脂肪/體重、內(nèi)臟脂肪/體重高于基礎(chǔ)組大鼠的相應(yīng)指標(biāo)，其間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義( P<0.05)。 四、各組大鼠肝臟病理改變 觀察各組大鼠肝臟大體標(biāo)本，基礎(chǔ)組大鼠肝臟顏色鮮紅，邊緣銳利，質(zhì)地柔軟，而其它各組大鼠

12、的肝臟呈土黃色，邊緣變鈍，質(zhì)地變硬，切面呈油膩感。由各組大鼠肝臟切片可見：基礎(chǔ)組大鼠肝細胞形態(tài)正常，豬油組大鼠的肝臟中均有少數(shù)肝細胞發(fā)生了脂肪變，但尚未達到脂肪肝的程度。不同劑量的橄欖油組大鼠均呈現(xiàn)出輕度脂肪肝的改變。 五、各組大鼠肝臟中HMG-CoA reductase和CYP7A1 mRNA的相對表達量 各組大鼠肝臟中HMG-CoA reductase mRNA和CYP7A1 mRNA相對表達量的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(