LEF1在脫甲基化藥物和紫杉醇聯(lián)合治療腎癌中的作用分析.pdf

1、目的：
　　研究脫甲基化藥物(DAC)與紫杉醇(PTX)聯(lián)合在治療RCC中的協(xié)同作用，并進(jìn)一步探討LEF1基因在此協(xié)同作用中的作用機(jī)制。
　　方法：
　　1、應(yīng)用MTT法測(cè)定作用72 h后的腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率，驗(yàn)證DAC與PTX聯(lián)合治療對(duì)ACHN，Caki-1和NC65（均為人腎透明細(xì)胞癌）細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用，并利用等輻射曲線(xiàn)分析檢驗(yàn)兩種藥物的協(xié)同作用。
　　2、我們已通過(guò)基因芯片技術(shù)篩選出兩種藥物相乘相關(guān)基因L

2、EF1，本試驗(yàn)將應(yīng)用定量PCR進(jìn)一步驗(yàn)證二者聯(lián)合應(yīng)用時(shí)LEF1的mRNA表達(dá)量變化。兩種腎癌細(xì)胞株ACHN，NC65分別用DAC:0.5，1，2，4，8μM；PTX：1，2，4，8，16 nM；DAC（1或2μM）+PTX（1，2，4，8，16 nM）處理3天。Rneasy mini kit(Qiagen)抽提t(yī)RNA，F(xiàn)irst strand cDNA synthesis kit(Amasham Pharmacia)逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA

3、第一條鏈，Real-time PCR采用SYBR Green PCR Master Mix(Applied Biosystems)進(jìn)行擴(kuò)增，IQ5進(jìn)行熒光定量分析。
　　結(jié)果：
　　1、DAC及PTX對(duì)腎癌細(xì)胞株的生長(zhǎng)抑制作用
　　脫甲基化藥物DAC及PTX對(duì)三種腎癌細(xì)胞株均有生長(zhǎng)抑制作用，并且細(xì)胞生存率隨藥物濃度的增加而下降，且呈劑量依賴(lài)性。
　　2、DAC和PTX的相乘作用
　　當(dāng)DAC及PTX兩種藥物

4、聯(lián)合應(yīng)用于腎癌細(xì)胞株時(shí)，生長(zhǎng)抑制率顯著高于PTX或DAC單劑作用效果，應(yīng)用等輻射曲線(xiàn)分析證實(shí)二者聯(lián)合應(yīng)用可顯著抑制腎癌細(xì)胞的生長(zhǎng)，具有相乘作用。
　　3、淋巴細(xì)胞增強(qiáng)因子-1（LEF1）基因參與了DAC和PTX相乘作用
　　通過(guò)定量PCR測(cè)定出DAC及PTX兩種藥物聯(lián)合應(yīng)用時(shí)LEF1下降，顯著低于PTX或DAC單劑作用效果，LEF1是兩種藥物聯(lián)合治療腎癌時(shí)的相乘相關(guān)基因。
　　結(jié)論：
　　1、DAC能夠提高RCC