結(jié)合珠蛋白基因多態(tài)性與中國(guó)人冠心病的關(guān)聯(lián)研究.pdf

1、目的: 本研究通過檢測(cè)浙江地區(qū)中國(guó)漢族人Hp基因多態(tài)性頻率,以探討Hp基因多態(tài)性與冠心病發(fā)生發(fā)展的關(guān)系. 對(duì)象與方法: 一、研究對(duì)象冠心病組:冠心病患者189例,均選自2005年3月至2005年12月浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院心內(nèi)科病房住院病人,符合世界衛(wèi)生組織(wH0)關(guān)于缺血性心臟病的命名及診斷標(biāo)準(zhǔn),所有患者經(jīng)冠狀動(dòng)脈造影證實(shí).其中男性149例,女性40例,平均年齡63.14±10.38歲. 對(duì)照組:

2、對(duì)照組242例,均選自同期浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院心內(nèi)科病房住院病人,所有入選者經(jīng)冠狀動(dòng)脈造影檢測(cè)完全正常.其中男性175例,女性67例,平均年齡61.56±10.44歲. 本研究人群個(gè)體之間無(wú)血緣關(guān)系. 二、冠心病的診斷 冠狀動(dòng)脈造影時(shí),分別對(duì)右冠狀動(dòng)脈、左冠狀動(dòng)脈前降支、左旋支和左主干狹窄病變程度進(jìn)行評(píng)價(jià).各主要分支存在>50﹪狹窄定義為有意義病變,診斷為冠心病. 三、冠心病危險(xiǎn)因子調(diào)查 設(shè)

3、計(jì)冠狀動(dòng)脈粥樣硬化登記調(diào)查表,詳細(xì)記錄每一患者的臨床表現(xiàn),輔助檢查,化驗(yàn)檢查結(jié)果,危險(xiǎn)因素及冠心病家族史. 冠心病經(jīng)典危險(xiǎn)因子按下述標(biāo)準(zhǔn)定義:1.高脂血癥采用2006年血脂異常防治指南,為血清總膽固醇(TC)≥200mg/dl或/和甘油三酯(TG)≥150mg/dl或/和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)≥120mg/dl和/或高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)≤40mg/dl.2.高血壓采用1999年世界衛(wèi)生組織和國(guó)際高血壓學(xué)會(huì)(

4、WHO/ISH)的標(biāo)準(zhǔn)定義和診斷.3.糖尿病符合1997年美國(guó)糖尿病學(xué)會(huì)(ADA)糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn).4.吸煙指目前吸煙和既往吸煙已經(jīng)戒煙者. 四、基因組DNA抽提和Hp基因多態(tài)性檢測(cè) 1.白細(xì)胞基因組DNA抽提:以酚/氯仿法提取外周血白細(xì)胞DNA. 2.Hp基因多態(tài)性檢測(cè):參考werner Koctl的PCR實(shí)驗(yàn)方法,分別用引物+P1和P2擴(kuò)增Hpl特異片段,引物P3和P4擴(kuò)增Hp2特異片段.上游引物P1:5'-G

5、CTGTCACTGCTGCGTAAAG-3下游引物P2:5'-GGTCAGTCTTTGGTTGGGTAG-3'擴(kuò)增Hpl特異性片段.PCR反應(yīng)體系:游引物P3:5'-CCTGCCTCGTATTAACTGCACAT-3下游引物P4:5'-CCGAGTGCTCCACATAGCCATGT-3'擴(kuò)增Hp2特異性片段,反應(yīng)體系與上相同. 擴(kuò)增條件:在PCR熱循環(huán)儀上擴(kuò)增,95℃預(yù)變性3分鐘,95℃變性1分鐘,69℃退火和延伸2分鐘(Pl和

6、P2擴(kuò)增時(shí))或1分鐘(P3和P4擴(kuò)增時(shí)),共35個(gè)循環(huán)后72℃終末延伸7分鐘.PCR產(chǎn)物以0.7﹪(Hpl特異片段產(chǎn)物)或1﹪(Hp2特異片段產(chǎn)物)瓊脂糖凝膠(含溴乙錠5μg/ml)電泳,經(jīng)70伏特20分鐘,在紫外光下觀察,攝影. 五、統(tǒng)計(jì)分析資料輸入數(shù)據(jù)庫(kù),應(yīng)用SPSS11.5軟件包作統(tǒng)計(jì)學(xué)處理.連續(xù)變量以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±S)表示,計(jì)數(shù)資料以頻數(shù)和構(gòu)成比表示.運(yùn)用Hardy-weinberg平衡檢驗(yàn)確認(rèn)研究樣本的群體代表性.

7、多組均數(shù)間比較采用方差分析,兩組均數(shù)間比較采用t檢驗(yàn),非正態(tài)分布和方差不齊的資料采用非參數(shù)統(tǒng)計(jì).計(jì)算各組基因型分布,等位基因頻率,并行x<'2>檢驗(yàn).所有結(jié)果在P<0.05時(shí)視為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義. 結(jié)果: 一.研究對(duì)象的Hardy-weinberg平衡中國(guó)浙江漢族研究對(duì)象符合Hardy-Weinberg平衡,對(duì)照組和冠心病組X<'2>值分別為1.364和0.007,P均>0.05. 二.浙江地區(qū)非冠心病患者漢族人的H

8、p基因多態(tài)性分布在中國(guó)漢族冠脈造影正常人群中,Hp1-1、Hp2-1、Hp2-2基因型頻率分別為0.13,0.52,0.35.Hpl與Hp2等位基因的頻率分布為0.39,0.61. 三.冠心病組與對(duì)照組Hp基因多態(tài)性的比較冠心病組及急性冠脈綜合征(Acute coronary syndrom,ACS)亞組Hp基因型分布與對(duì)照組相比具有顯著差異(P均<0.01),表現(xiàn)為冠心病患者及ACS亞組的Hp2-2頻率明顯高于健康對(duì)照組(0.

9、54、0.57vs0.35,P均<0.01),Hp2等位基因的頻率也明顯高于對(duì)照組(0.74、0.76vs0.61,P均<0.01). 四.Hp基因多態(tài)性與冠心病危險(xiǎn)因子的關(guān)系冠心病組Hp基因多態(tài)性與冠心病危險(xiǎn)因子比較,可見Hp基因型分布與冠心病年齡、性別、收縮壓、舒張壓、總膽固醇(TC)、甘油三脂(TG)、低密脂蛋白(LDL)、高密脂蛋白(HDL)以及高血壓、糖尿病和吸煙均無(wú)顯著差異(P均>O.05). 五.冠心病組H

10、p基因多態(tài)性與心血管家族史的比較冠心病患者中有/無(wú)家族史Hp基因型及等位基因頻率相比無(wú)顯著差異(P>0.05). 結(jié)論: 1.浙江地區(qū)漢族人群存在Hp基因多態(tài)性,冠脈造影正常人群Hpl-1、Hp2-1、Hp2-2基因型頻率分別為0.13,0.52,0.35,Hpl與Hp2等位基因的頻率分布為0.39,0.61.為在我國(guó)漢族人群中進(jìn)行Hp基因多態(tài)性與疾病的關(guān)聯(lián)研究提供了該基因分布的參考數(shù)據(jù). 2.Hp2-2基因型與