黃芩苷抗癲癇發(fā)生及神經(jīng)保護(hù)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、癲癇是神經(jīng)系統(tǒng)最常見的疾病之一，以反復(fù)的自發(fā)發(fā)作為特征，還伴隨認(rèn)知，心理以及社會(huì)的影響。
　　癲癇發(fā)生是指各種傷害性腦損傷，（如外傷、中風(fēng)、癲癇持續(xù)狀態(tài)、顱內(nèi)感染等）誘導(dǎo)腦內(nèi)級(jí)聯(lián)事件的發(fā)生，最后導(dǎo)致癲癇易感性增高，并出現(xiàn)癲癇自發(fā)性發(fā)作的過程。目前癲癇的治療仍以藥物治療為主。雖然有各種類型的抗癲癇藥，但仍有約30％的患者對(duì)藥物治療不敏感，而且，目前的這些藥物主要是癥狀性的，即針對(duì)癲癇發(fā)作的癥狀，不針對(duì)導(dǎo)致癲癇發(fā)生的病理環(huán)節(jié)和進(jìn)程。所

2、以，我們?nèi)云惹行枰獙ふ抑委煱d癇的新的療法。
　　我們前期的實(shí)驗(yàn)研究表明，SE后齒狀回內(nèi)大量新生的神經(jīng)元出現(xiàn)向門區(qū)的異常遷移，而且小膠質(zhì)細(xì)胞激活在異常遷移中起很大作用。應(yīng)用小膠質(zhì)細(xì)胞特異性的阻斷劑米諾環(huán)素可阻止癲癇發(fā)作導(dǎo)致的新生神經(jīng)元異常遷移。
　　近年來，藥用植物藥的研究是一個(gè)熱點(diǎn)。黃芩苷是從傳統(tǒng)中藥黃芩中提取的重要單體，它可透過血腦屏障，通過抗炎、抗凋亡等發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用，可有效保護(hù)腦缺血等損傷。既往研究表明有抗炎、抗氧化

3、、抗凋亡及神經(jīng)保護(hù)作用，也有研究表明它可以作用于GABAA受體苯二氮卓類位點(diǎn)，有抗抑郁作用，那么它對(duì)于癲癇有無保護(hù)作用呢？
　　基于以上假設(shè)：我們做了以下實(shí)驗(yàn)：本研究建立化學(xué)誘導(dǎo)的大鼠癲癇模型，觀察黃芩苷的抗癲癇發(fā)生及神經(jīng)保護(hù)作用，而且我們觀察了黃芩苷對(duì)于神經(jīng)干細(xì)胞增殖及分化的影響。期望通過本研究的完成，為癲癇的防治提供新的思路與靶點(diǎn)。
　　1.黃芩苷對(duì)匹羅卡品誘導(dǎo)的癲癇模型大鼠的抗驚厥與神經(jīng)保護(hù)作用研究
　　我們采用

4、匹羅卡品誘導(dǎo)的大鼠癲癇模型，我們給予黃芩苷100mg/kg或者生理鹽水腹腔注射預(yù)處理，30分鐘后給予大鼠腹腔注射400mg/kg匹羅卡品建立化學(xué)致癲模型，并于SE后24小時(shí)，36小時(shí)分別行生物學(xué)及免疫組織化學(xué)檢測(cè)，觀察黃芩苷對(duì)大鼠行為學(xué)，海馬的氧化應(yīng)激指標(biāo)改變，以及海馬神經(jīng)元壞死、變性及凋亡的影響。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：
　　1)黃芩苷可明顯降低大鼠SE發(fā)生率，延長(zhǎng)SE發(fā)作潛伏期，降低死亡率。
　　2)黃芩苷對(duì)癲癇發(fā)作導(dǎo)

5、致的氧化應(yīng)激改變有一定的保護(hù)作用
　　3)黃芩苷對(duì)SE導(dǎo)致的神經(jīng)元壞死、變性有一定保護(hù)作用，可抗凋亡，其抗凋亡機(jī)制可能與抑制caspase-3通路有關(guān)。
　　2．黃芩苷抗癲癇發(fā)生及改善癲癇后認(rèn)知功能障礙的實(shí)驗(yàn)研究
　　在前期實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，接下來我們觀察了黃芩苷是否具有抗癲癇發(fā)生的作用。我們采用采用鋰-匹羅卡品誘導(dǎo)的大鼠癲癇模型，分別在注射氯化鋰及匹羅卡品前1小時(shí)給予黃芩苷100mg/kg或者生理鹽水腹腔注射。SE形成后，

6、動(dòng)物腹腔注射黃芩苷或等量的生理鹽水連續(xù)14天或直至動(dòng)物處死。SE后3天采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)炎性因子IL-1β和TNF-α，于SE后7天行FJB染色觀察海馬細(xì)胞變性，在SE后7天行免疫組化染色觀察小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞的激活。SE后14d-28d采用視頻監(jiān)測(cè)觀察各組大鼠癲癇自發(fā)發(fā)作。并在SE后31-36天行Morris水迷宮測(cè)試，觀察黃芩苷對(duì)大鼠癲癇發(fā)作后認(rèn)知功能的影響。在SE后5周后（水迷宮檢測(cè)后）采用Timm染色評(píng)估

7、黃芩苷對(duì)癲癇發(fā)作后苔蘚纖維芽生的影響。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：
　　1)黃芩苷可抑制SE后急性期炎性因子的釋放。
　　2)黃芩苷抑制SE后7天小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞的激活。
　　3)黃芩苷對(duì)SE導(dǎo)致的神經(jīng)元變性有保護(hù)作用。
　　4)黃芩苷對(duì)SE后大鼠自發(fā)發(fā)作有改善作用。
　　5)黃芩苷對(duì)SE后大鼠認(rèn)知功能障礙有保護(hù)作用。
　　6)黃芩苷可抑制SE導(dǎo)致的苔蘚纖維芽生。
　　3黃芩苷對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞

8、增殖及分化的影響
　　我們?nèi)≡旋g14.5d的SD大鼠的大腦（皮層或后側(cè)神經(jīng)節(jié)隆起）進(jìn)行神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)，并取P2代神經(jīng)干細(xì)胞，觀察黃芩苷對(duì)于神經(jīng)干細(xì)胞增殖及分化的影響。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：
　　1)黃芩苷可促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞的增殖。
　　2)黃芩苷可誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化，抑制神經(jīng)干細(xì)胞向膠質(zhì)細(xì)胞分化。
　　3)黃芩苷可誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞向GABA能神經(jīng)元分化。
　　4)黃芩苷誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞定向分化的機(jī)制有