梓醇預(yù)處理對(duì)異丙腎上腺素誘導(dǎo)的大鼠心肌損傷的保護(hù)作用及相關(guān)機(jī)制的研究.pdf

1、前言：
　　 冠心病是臨床中關(guān)注的一個(gè)焦點(diǎn),它是由于冠狀動(dòng)脈供血與心肌需求不平衡導(dǎo)致的心肌損傷的急性狀態(tài),心肌缺血引起的損傷甚至壞死是冠心病的主要病理改變。它不僅在西方國家,而且在發(fā)展中國家是一個(gè)主要的公共健康問題。根據(jù)世界衛(wèi)生組織預(yù)測(cè),到2020年它將是世界范圍內(nèi)死亡的主要原因。近些年,介入手術(shù)在心血管疾病治療方面取得很大進(jìn)展,但是藥物治療仍然是心血管疾病的基石,因此開發(fā)新的抗心肌缺血藥物并探索抗心肌缺血機(jī)制仍是一項(xiàng)重要的研究

2、課題。
　　 炎癥是機(jī)體對(duì)損傷因子所產(chǎn)生的防御反應(yīng),是由多種細(xì)胞和細(xì)胞因子共同參與的復(fù)雜過程。它不僅參與感染性疾病的全過程,而且在非感染性疾病中也發(fā)揮十分重要的作用。目前國內(nèi)外的研究表明,冠心病、高血壓、心力衰竭、血脂異常、缺血再灌注損傷等疾病的發(fā)生發(fā)展都與炎癥反應(yīng)有密切相關(guān)性。例如對(duì)CRP等炎癥因子的檢驗(yàn)已經(jīng)作為衡量多種心血管疾病嚴(yán)重程度的重要指標(biāo)。另外他汀類藥物的抗炎活性使其在心血管疾病的廣泛應(yīng)用。
　　 異丙腎上腺

3、素是一種合成的兒茶酚胺,它能導(dǎo)致嚴(yán)重的心肌損傷。根據(jù)實(shí)驗(yàn)以及臨床研究的相關(guān)證據(jù)表明:氧化應(yīng)激、凋亡、炎癥反應(yīng)與其心肌損傷密切相關(guān),近年來被廣泛應(yīng)用于心肌缺血的藥理學(xué)和藥效學(xué)研究。
　　 梓醇作為地黃中的主要有效成份,屬于環(huán)烯醚萜單糖類。相關(guān)研究表明梓醇具有多種生物學(xué)活性,如抗炎、抗氧化、抗凋亡、降血糖等多種生物學(xué)活性。目前關(guān)于對(duì)梓醇的研究主要集中在其對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)的保護(hù)作用,對(duì)心血管系統(tǒng)的相關(guān)研究才剛剛起步。本課題組的前期研究發(fā)現(xiàn)梓

4、醇在細(xì)胞水平對(duì)心肌細(xì)胞也有保護(hù)作用。本實(shí)驗(yàn)中我們進(jìn)一步從炎癥角度來分析梓醇對(duì)的心肌損傷的作用,進(jìn)一步為證實(shí)梓醇的心血管保護(hù)作用提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和理論基礎(chǔ)。
　　 在本實(shí)驗(yàn)中我們觀察了梓醇對(duì)異丙腎上腺素誘導(dǎo)大鼠心肌損傷的作用并分析其潛在的心肌保護(hù)作用機(jī)制,探討其保護(hù)作用是否與減少TNF-α和IL-1β的表達(dá),抑制NF-kB的活性及調(diào)節(jié)凋亡相關(guān)因子Bcl-2和Bax的表達(dá)有關(guān)。
　　 材料與方法：
　　 第一部分：

5、>　　 1、分組及給藥方法:
　　 將48只雄性wistar大鼠(12周齡)隨機(jī)分為六組,分別是:①正常對(duì)照組(Control組);②模型組(Model組);③陽性藥物對(duì)照組(17anshinoneⅡA組):;④低劑量梓醇組(Catalpol(L)組);⑤中劑量梓醇組(Catalpol(M)組);⑥高劑量梓醇組(Catalpol(H)組)。
　　 2、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容
　　 (1)動(dòng)物模型制作:
　　 根據(jù)相關(guān)

6、文獻(xiàn),連續(xù)兩天皮下注射異丙腎上腺素(85mg/kg.d)誘導(dǎo)心肌損傷模型。
　　 (2)各組大鼠血清LDH及CK-MB水平用自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)。
　　 (3)HE染色用以觀察各組大鼠心肌病理學(xué)改變并根據(jù)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)損傷程度進(jìn)行分級(jí)。
　　 (4)各組大鼠心肌TNF-α和IL-1β的mRNA表達(dá)用realtimeRT-PCR檢測(cè)。
　　 (5)各組大鼠心肌TNF-α和IL-1β的蛋白表達(dá)用免疫組織化學(xué)檢測(cè)。<

7、br>　　 (6)各組大鼠心肌NF-kBp65及IkB的蛋白表達(dá)用wetern-blot檢測(cè)。
　　 第二部分：
　　 (1)分組與第一部分相同。
　　 (2)透射電鏡檢測(cè)各組大鼠心肌細(xì)胞核的超微改變。
　　 (3)TUNEL檢測(cè)各組大鼠心肌細(xì)胞凋亡的情況,并計(jì)算凋亡系數(shù)。
　　 (4)realtimeRT-PCR檢測(cè)各組大鼠心肌組織凋亡相關(guān)因子Bax及Bcl-2的mRNA表達(dá)。
　　

8、(5)免疫組織化學(xué)檢測(cè)各組大鼠心肌組織凋亡相關(guān)因子Bax及Bcl-2的蛋白表達(dá)。
　　 (6)western-blot檢測(cè)各組大鼠心肌組織caspase-3(凋亡執(zhí)行者)的蛋白表達(dá)。
　　 統(tǒng)計(jì)分析：
　　 所有數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS13.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,計(jì)量資料采用均數(shù)-x±標(biāo)準(zhǔn)差表示。多組間比較應(yīng)用單因素方差分析(one-wayANOVA)統(tǒng)計(jì),以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

9、　　 第一部分：
　　 (1)連續(xù)皮下注射異丙腎上腺素可以引起明顯的大鼠心肌組織損傷(心肌酶的升高和心肌組織的損傷改變)。
　　 (2)生化(血清LDH和CK-MB)和病理學(xué)(HE染色)檢測(cè)結(jié)果顯示:不同劑量的梓醇(2.5,5,10mg/kg)可以減輕異丙腎上腺素誘導(dǎo)的心肌損害,以中高劑量梓醇明顯。
　　 (3)與正常組比較,模型組大鼠心肌組織的TNF-α和IL-1β的mRNA和蛋白表達(dá)明顯升高(P＜0.01)

10、。經(jīng)梓醇預(yù)處理后,尤其在中高劑量梓醇組,可以明顯減少心肌組織的TNF-α和IL-1β的mRNA和蛋白表達(dá)。
　　 (4)大劑量異丙腎上腺素可以上調(diào)大鼠心肌細(xì)胞NF-kBp65的蛋白表達(dá),減少IkB的表達(dá),梓醇預(yù)處理可以逆轉(zhuǎn)這一改變,并呈劑量依賴性。
　　 第二部分：
　　 (1)透射電鏡結(jié)果顯示:梓醇可以阻止異丙腎上腺素誘導(dǎo)的大鼠心肌細(xì)胞核的染色質(zhì)邊集。
　　 (2)TUNEL檢測(cè)顯示:與正常對(duì)照組比較,

11、異丙腎上腺素可以明顯增加心肌細(xì)胞凋亡陽性細(xì)胞比例(2.25±0.58%vs32.2±4.79%,P＜0.01),經(jīng)梓醇預(yù)處理后,可以阻止這種改變。
　　 (3)與正常組比較,模型組大鼠心肌Bax的mRNA和蛋白表達(dá)明顯升高(P＜0.01),而Bcl-2明顯降低(P＜0.01)。梓醇預(yù)處理可以逆轉(zhuǎn)這種改變。
　　 (4)異丙腎上腺素可以增加大鼠心肌組織中caspase-3(凋亡執(zhí)行者)的蛋白表達(dá),梓醇預(yù)處理可以呈劑量依賴性

12、的阻止這一改變。
　　 結(jié)論：
　　 (1)大劑量皮下注射異丙腎上腺素通過誘導(dǎo)心肌炎癥反應(yīng)和凋亡可以引起明顯的大鼠心肌組織損傷。
　　 (2)梓醇預(yù)處理可以呈劑量依賴性的保護(hù)異丙腎上腺素誘導(dǎo)的大鼠心肌損傷。
　　 (3)梓醇的心肌保護(hù)作用機(jī)制部分與抑制大鼠心肌組織中TNF-α和IL-1β的mRNA和蛋白表達(dá),調(diào)節(jié)心肌組織中核轉(zhuǎn)錄因子NF-kB的活性有關(guān)。
　　 (4)梓醇的抗凋亡作用與調(diào)節(jié)心肌組織