氧化應(yīng)激與哮喘氣道炎癥、氣道重塑的關(guān)系及藥物干預(yù)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：建立SD大鼠哮喘氣道重塑模型；探討在哮喘氣道重塑模型基礎(chǔ)上，氧化應(yīng)激與氣道炎癥、氣道重塑的關(guān)系，及經(jīng)抗氧化劑茶多酚、冬蟲夏草軟膠囊（金水寶）干預(yù)后，對氧化應(yīng)激、氣道炎癥、氣道重塑的影響。為防治哮喘氣道重塑提供新的研究依據(jù)。 方法：1、利用卵蛋白（OVA）加免疫佐劑（氫氧化鋁凝膠）間隔7天致敏和隔日霧化OVA，并延長OVA激發(fā)時(shí)間的方法，建立大鼠慢性哮喘氣道重塑模型。將64只健康雌性SD大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為：正常對照組、哮

2、喘組，每組再分4周、8周、12周、16周四個(gè)時(shí)間段，每小組8只。正常對照組所有干預(yù)用生理鹽水代替。觀察指標(biāo)：①肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid，BALF）細(xì)胞計(jì)數(shù)與分類，②肺組織行蘇木精.伊紅（HE）染色、過碘酸雪夫（PAS）染色、Masson染色及轉(zhuǎn)化生長因子-β1（TGF-β1）的免疫組化染色。圖像分析：進(jìn)行支氣管周圍炎性指數(shù)及杯狀細(xì)胞粘液指數(shù)評分，測定支氣管壁的平滑肌面積（WAm）、膠原沉積面積

3、（Wcol），并用支氣管內(nèi)周長（Pbm）標(biāo)化，測定肺組織TGF-β1的積分光密度值（IOD值）。 2、在成功建立大鼠哮喘氣道重塑模型的基礎(chǔ)上。將48只大鼠隨機(jī)分為：對照組、模型組、早期布地奈德組（早BUD組）、早期茶多酚組[早TP組，400mg/（kg·d）]、晚期布地奈德組（晚BUD組）、晚期茶多酚組[晚TP組，400mg/（kg·d）]，每組8只。早BUD組、早TP組在造模2周前給藥，晚BUD組、晚TP組在造模5周后給藥。造

4、模12周時(shí)觀察指標(biāo)：①BALF細(xì)胞計(jì)數(shù)與分類；②采用親和素.生物素酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ABC-ELISA）測定肺組織TGF-β1含量，采用硫代巴比妥（TBA）法測定肺組織丙二醛（MDA）含量；用黃嘌呤氧化酶法測定肺組織超氧化物歧化酶（SOD）活力：③肺組織病理觀察及圖像分析：進(jìn)行支氣管周圍炎性指數(shù)及粘液指數(shù)評分，測定支氣管壁的WAm/Pbm、Wcol/Pbm，測定肺組織TGF-β1的IOD值。 3、在成功建立大鼠哮喘氣道重塑模型的

5、基礎(chǔ)上，探討中藥冬蟲夏草軟膠囊對哮喘大鼠氧化應(yīng)激、氣道炎癥、氣道重塑的影響。將40只大鼠隨機(jī)分為5組：對照組（A組）、哮喘組（B組）、布地奈德組（C組）、冬蟲夏草低劑量組[D組，310 mg/（kg·d）]、冬蟲夏草高劑量組[E組，620 mg/（kg·d）]，每組8只。藥物干預(yù)均在造模5周后進(jìn)行，造模12周時(shí)觀察指標(biāo)[具體同上2觀察指標(biāo)]。 結(jié)果：1、大鼠在哮喘造模4周時(shí)即出現(xiàn)明顯的氣道管腔縮窄，支氣管上皮細(xì)胞脫落，支氣管粘膜

6、增厚、皺襞增多、延長，肺泡間隔、氣道平滑肌增厚，膠原沉積增多，支氣管粘膜上皮間杯狀細(xì)胞明顯增生、粘液分泌旺盛，TGF-β1廣泛表達(dá)并增強(qiáng)，且隨時(shí)間推移上述改變呈增加趨勢；哮喘組BALF細(xì)胞總數(shù)、嗜酸性粒細(xì)胞（Eos）計(jì)數(shù)、中性粒細(xì)胞（PMN）計(jì)數(shù)、炎性指數(shù)、粘液指數(shù)明顯增多，且隨著時(shí)間推移，Eos計(jì)數(shù)呈逐漸下降趨勢，PMN計(jì)數(shù)呈逐漸升高趨勢。相關(guān)分析表明，BALF細(xì)胞總數(shù)與炎性指數(shù)呈良好的正相關(guān)性，氣道膠原沉積面積與TGF-β1的表達(dá)呈

7、良好的正相關(guān)。說明SD大鼠哮喘氣道重塑模型建立成功。 2、在成功建立大鼠哮喘氣道重塑模型的基礎(chǔ)上，經(jīng)抗氧化劑茶多酚、中藥冬蟲夏草干預(yù)后，MDA含量明顯降低，SOD活性明顯升高，且BALF細(xì)胞總數(shù)、Eos、PMN、粘液指數(shù)、炎性指數(shù)均明顯減少，其中PMN、粘液指數(shù)減少的最明顯。且茶多酚早期干預(yù)優(yōu)于茶多酚晚期干預(yù)，冬蟲夏草高劑量優(yōu)于冬蟲夏草低劑量，晚期單用布地奈德療效最差。相關(guān)分析表明，MDA含量與SOD活性呈良好的負(fù)相關(guān)性，粘液指

8、數(shù)、PMN計(jì)數(shù)與MDA含量均呈良好的正相關(guān)性。說明氧化應(yīng)激水平越高，氣道炎癥越明顯，經(jīng)抗氧化劑茶多酚、冬蟲夏草干預(yù)后，氣道炎癥有明顯改善。 3、經(jīng)抗氧化劑茶多酚、冬蟲夏草干預(yù)后，支氣管平滑肌面積、膠原沉積面積、TGF-β1表達(dá)及含量明顯減少。且茶多酚早期干預(yù)優(yōu)于茶多酚晚期干預(yù)，冬蟲夏草高劑量優(yōu)于冬蟲夏草低劑量，晚期單用布地奈德療效最差。相關(guān)分析表明，膠原沉積面積、TGF-β1表達(dá)與MDA含量呈良好的正相關(guān)性。說明氧化應(yīng)激水平越高

9、，氣道重塑越明顯，經(jīng)抗氧化劑茶多酚、冬蟲夏草干預(yù)后，氣道重塑有改善。 結(jié)論：1、采用問隔7天致敏，延長霧化卵蛋白時(shí)間的方法，可以成功建立良好的SD大鼠哮喘氣道重塑模型。且哮喘模型早期就有氣道重塑的改變，后期BALF的PMN計(jì)數(shù)逐漸升高。 2、氧化應(yīng)激可能是哮喘氣道重塑形成的機(jī)制之一。氧化應(yīng)激水平越高，哮喘氣道重塑越明顯。茶多酚、冬蟲夏草軟膠囊可能通過控制氧化應(yīng)激水平，降低氣道炎癥（特別是PMN）、減少粘液細(xì)胞增生/分泌、