TWEAK及其受體Fnl4在酒精中毒性肌損傷中的表達(dá).pdf

1、慢性酒精中毒性肌?。–hronic alcoholic myopathy，CAM）是由于長(zhǎng)期酗酒引起的一種肌肉病，在嗜酒者中發(fā)病率約40%-60%，臨床表現(xiàn)為肌無(wú)力、肌痛、肌萎縮和行走困難，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。CAM的特點(diǎn)是選擇性侵犯Ⅱ型肌纖維，而Ⅰ型肌纖維相對(duì)不受累。作為可治療干預(yù)的肌病，研究其發(fā)病機(jī)制，具有十分重要的臨床意義。Fernández-SolàJ已證實(shí)：細(xì)胞凋亡存在于CAM骨骼肌中，但其致病機(jī)制不清。 腫瘤壞死

2、因子樣凋亡微弱誘導(dǎo)劑（TNF-likeweak inducer of apoptosis，TWEAK）是腫瘤壞死因子（TNF）配體超家族的成員，TWEAK轉(zhuǎn)錄子足量表達(dá)于人體多種組織，是一種廣泛表達(dá)的TNF家族配基。通過(guò)與受體特異性結(jié)合，如成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)的早期反應(yīng)蛋白14（Fn14）等，傳遞死亡信號(hào)，誘導(dǎo)細(xì)胞的凋亡、激活NF-κB信號(hào)傳導(dǎo)通路，維持免疫系統(tǒng)的穩(wěn)定性等方面具有關(guān)鍵性的作用。 因此我們推測(cè)TWEAK可能通過(guò)與

3、其受體Fn14結(jié)合，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，參與CAM的發(fā)生發(fā)展過(guò)程． 目的：本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)大鼠酒精中毒性骨骼肌損傷中TWEAK和Fn14的體內(nèi)外表達(dá)，探討TWEAK/Fn14與酒精中毒性骨骼肌損傷發(fā)病過(guò)程的相關(guān)性。 方法： 1．大鼠骨骼肌酒精中毒性肌病模型制備與原代細(xì)胞培養(yǎng)。 2．采用熒光實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈反應(yīng)（real-time fluorescence quantitative PCR）和免疫組化、West

4、ernBlot方法檢測(cè)大鼠酒精損傷跖肌中TWEAK和Fn-14的mRNA和蛋白的表達(dá)。 結(jié)果： 1．動(dòng)物模型建立：實(shí)驗(yàn)組大鼠精神狀態(tài)差，活動(dòng)減少，皮毛無(wú)光澤（簡(jiǎn)單寫(xiě)出具體行為特點(diǎn)），骨骼肌纖維排列松散，明顯萎縮。實(shí)驗(yàn)組原代細(xì)胞大小不等，形態(tài)不規(guī)則。倒置顯微鏡下均可觀察到骨骼肌細(xì)胞呈梭型，有細(xì)胞融合現(xiàn)象和自主收縮。 2．TWEAK與Fn14在體內(nèi)與體外實(shí)驗(yàn)組跖肌中均表達(dá)升高（P<0．05）。腓腸肌與比目魚(yú)肌體內(nèi)外T

5、WEAK與Fn14表達(dá)無(wú)顯著性差異，（P>0．05）。 3．實(shí)驗(yàn)組TWEAK與Fn14體外mRNA水平上調(diào)高于體內(nèi)（P<0．05）；實(shí)驗(yàn)組Fn14在體外的蛋白表達(dá)上調(diào)高于體內(nèi)（P<0．05），TWEAK蛋白表達(dá)體內(nèi)外無(wú)顯著性差異（P>0．05）。腓腸肌與比目魚(yú)肌體內(nèi)外TWEAK與Fn14表達(dá)均無(wú)顯著性差異，（P>0．05）。 結(jié)論： 1．實(shí)驗(yàn)組TWEAK及其受體Fn14的高表達(dá)與酒精攝入具有相關(guān)性。提示可誘導(dǎo)骨骼