慢性酒精中毒性肌病一氧化氮合酶與抗氧化狀態(tài)關(guān)系的研究.pdf

1、本文旨在利用大鼠慢性酒精中毒性肌病模型檢測(cè)骨骼肌中NOS的表達(dá)情況，以及氧化-抗氧化狀態(tài)的變化。比較分析慢性酒精中毒性肌病中的氧化-抗氧化狀態(tài)和一氧化氮合酶的改變特征，進(jìn)一步地探討該病發(fā)病機(jī)制，為CAM的防治提供理論依據(jù)。 方法：(1)建立慢性酒精中毒性大鼠肌病模型，觀察大鼠體重、肌肉濕重、脛骨長(zhǎng)度及濕重、和肌肉組織病理改變。(2)實(shí)驗(yàn)組用含飼料總能量36﹪的酒精給大鼠灌胃，對(duì)照組用含與酒精熱量相等的蔗糖灌胃，兩組均喂飼改良的全

2、營(yíng)養(yǎng)高脂飼料，于10周后，取后肢肌肉，在分離出腓腸肌、比目魚(yú)肌、跖肌后，將各類肌肉均分別地制備成冰凍切片和肌組織勻漿，經(jīng)組織化學(xué)染色確認(rèn)成模后采用免疫組化方法檢測(cè)nNOS和iNOS的表達(dá)；采用免疫熒光法檢測(cè)nNOS的表達(dá)；采用分光光度計(jì)法檢測(cè)抗氧化指標(biāo)—超氧化物歧化酶(Superoxidedismutase，SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(Glutathioneperoxidase，GSH-px)和丙二醛(Maleicdialdehyde

3、，MDA)以及iNOS活性的變化。 結(jié)果：(1)酒精染毒后，Ⅱ型肌纖維較Ⅰ型肌纖維病理?yè)p害更嚴(yán)重，酒精染毒大鼠出現(xiàn)了肌纖維變性、壞死，肌纖維萎縮呈角形、條形或不規(guī)則形改變，炎細(xì)胞浸潤(rùn)和肌纖維再生、肌間結(jié)締組織增生等典型的病理改變。(2)分光光度計(jì)法顯示：實(shí)驗(yàn)組同對(duì)照組大鼠比較，以Ⅱ型肌纖維為主的肌肉(跖肌)中SOD含量升高19.62﹪(49.63±3.61與41.49±8.21，P＜0.05)；GSH-px含量降低15.86﹪(

4、74.82±9.85與88.92±15.40，P＜0.05)；MDA含量升高77.32﹪(58.73±35.44與33.12±20.20，P＜0.05)；iNOS含量升高94.16﹪(0.899±0.484與0.463±0.142，。P＜0.05)，而以Ⅰ型肌纖維為主的肌肉(比目魚(yú)肌)中除MDA值較對(duì)照有顯著升高外，SOD、GSH-px、iNOS含量均無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。(3)免疫組化結(jié)果顯示：iNOS在實(shí)驗(yàn)組肌細(xì)胞胞漿中有較

5、強(qiáng)的陽(yáng)性表達(dá)，nNOS在實(shí)驗(yàn)組肌細(xì)胞肌膜上的表達(dá)量降低，有的還出現(xiàn)了向胞漿轉(zhuǎn)移的現(xiàn)象。(4)免疫熒光結(jié)果顯示：實(shí)驗(yàn)組同對(duì)照組相比，nNOS在肌膜上的熒光染色出現(xiàn)明顯下調(diào)，甚至缺失。 結(jié)論：(1)本研究結(jié)果支持慢性酒精中毒性肌病大鼠體內(nèi)存在自由基的釋放和清除機(jī)制的紊亂；(2)酒精能誘發(fā)機(jī)體的氧化應(yīng)激反應(yīng)，致機(jī)體氧化抗氧化失衡；(3)iNOS的胞漿表達(dá)增高和nNOS的肌膜表達(dá)下調(diào)與肌病的發(fā)生密切相關(guān)，提示酒精誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激損傷和一氧