神經(jīng)毒素納米粒在體外血腦屏障上轉(zhuǎn)運(yùn)特性研究.pdf

1、目的：本實(shí)驗(yàn)建立原代培養(yǎng)的大鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞（Rat brain microvascular endothelial cells，rBMECs）模型為體外BBB模型，考察離體情況下T-80-NT-NP在血腦屏障上的轉(zhuǎn)運(yùn)特性極其轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制。
　　方法：以PBCA為載體材料，采用乳化聚合法制備N(xiāo)T-NP，經(jīng)T-80修飾，制得T-80-NT-NP。原代培養(yǎng)大鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞（rBMECs），大腦組織碎片經(jīng)150μm，75μm濾網(wǎng)過(guò)濾后

2、，Ⅱ膠酶消化分離得到rBMECs，建立體外BBB細(xì)胞模型。MTT法考察T-80和T-80-NT-NP對(duì)rBMECs的細(xì)胞毒性作用。以體外BBB的rBMECs為細(xì)胞模型，考察時(shí)間、溫度、濃度對(duì)T-80-NT-NP攝取、外排的影響。采用Millicell insert結(jié)合培養(yǎng)rBMECs，建立跨 BBB轉(zhuǎn)運(yùn)的體外細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)模型，考察T-80-NT-NP在 BBB上的轉(zhuǎn)運(yùn)特性。
　　結(jié)果：NT-NP外觀呈圓形或類(lèi)圓形，平均粒徑78.3 n

3、m，分散均勻，包封率和載藥量分別為80.25％和0.124%，Zeta電位為-15.37 mV；rBMECs培養(yǎng)約5-6天后，生長(zhǎng)成致密單層細(xì)胞，具有生長(zhǎng)接觸抑制現(xiàn)象，但未見(jiàn)重疊生長(zhǎng)。MTT法，T-80溶液濃度在﹥400 ng·mL-1時(shí)，對(duì)rBMECs無(wú)顯著毒性；含原藥NT濃度100~400 ng·mL-1范圍之間，原藥NT和NP毒性都有濃度依賴(lài)性；濃度≥200 ng·mL-1的NP對(duì)rBMECs毒性顯著增加；NP毒性比原藥NT有顯著

4、增大，有顯著性差異（p<0.01）；T-80包裹NP比未包裹毒性大，但未見(jiàn)顯著差異（p>0.05）。NT-NP和T-80-NT-NP在rBMECs上攝取、外排都具有時(shí)間、溫度、濃度依賴(lài)性：無(wú)論在37℃和4℃、不同濃度和不同孵育時(shí)間條件下，rBMECs對(duì)T-80-NT-NP的攝取量和外排時(shí)細(xì)胞內(nèi)滯留藥物量均顯著高于未T-80修飾NT-NP。Millicell insert結(jié)合培養(yǎng)rBMECs的跨BBB細(xì)胞模型的TEER值為（146.5±1