天然HIV蛋白酶抑制劑的分離與笨并呋喃類化合物的合成及活性研究.pdf

1、艾滋病(AIDS)是一種由人類免疫缺陷病毒(HIV)引起的免疫和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的退行性疾病。HIV-1逆轉(zhuǎn)錄酶、蛋白酶和整合酶是HIV-1基因在復(fù)制過程中的3個(gè)關(guān)鍵酶，到目前為止抗HIV/AIDS藥物的研究與開發(fā)主要是針對(duì)這3個(gè)關(guān)鍵酶進(jìn)行設(shè)計(jì)的。蛋白酶抑制劑能防止病毒母體蛋白分裂成新的HIV感染細(xì)胞和病毒復(fù)制的功能蛋白，這一發(fā)現(xiàn)使艾滋病的治療有了突破性進(jìn)展。
　　 目前人們已經(jīng)制備了大量的肽類和非肽類HIV蛋白酶抑制劑。目前已在臨

2、床廣泛應(yīng)用的HIV蛋白酶抑制劑有:沙奎那韋、茚地那韋、利托那韋等，然而長(zhǎng)期使用這些蛋白酶抑制劑產(chǎn)生明顯的毒副作用和耐藥性。因此尋找新的HIV蛋白酶抑制劑成為艾滋病治療更有效的途徑。
　　 從微生物發(fā)酵產(chǎn)物中分離提取活性物質(zhì)是發(fā)現(xiàn)新型藥物先導(dǎo)化合物的重要途徑。本工作選擇一株陽性菌株鏈霉菌I03A-04862(CGMCC4766)，采用高通量熒光底物HIV-1蛋白酶模型進(jìn)行活性跟蹤，對(duì)發(fā)酵液中的活性成分進(jìn)行了分離純化，利用大孔樹脂H

3、P-20柱層析、ODS柱層析和HPLC制備柱層析等色譜方法分離得到一個(gè)活性較好的化合物，命名為4862F。通過ESI-MS、1H-NMR、13C-NMR、DEPT、1H-1H COSY、HSQC、HMBC、TOCSY、ROESY等波譜解析方法對(duì)該化合物進(jìn)行了結(jié)構(gòu)解析，發(fā)現(xiàn)其結(jié)構(gòu)特征為含有一個(gè)N,N,N-三甲基取代的氨基酸。最終確定4862F為一個(gè)由五個(gè)氨基酸鏈接的寡肽，其中有兩個(gè)亮氨酸，一個(gè)纈氨酸，一個(gè)脫氫組氨酸和一個(gè)N,N,N-三甲基

4、取代的酪氨酸，五個(gè)氨基酸的連接順序?yàn)镹,N,N-(trimethyl)-Tyr-Leu-Val-Leu-(-2H)-His。該化合物經(jīng)Scifinder Scholar CA網(wǎng)絡(luò)版數(shù)據(jù)庫和Reaxys數(shù)據(jù)庫檢索，尚未見文獻(xiàn)報(bào)道。
　　 該化合物在高通量熒光底物HIV-1蛋白酶模型上的半數(shù)抑制率IC50為15.26nM。采用CPE法測(cè)定其對(duì)MDCK細(xì)胞的半數(shù)毒性濃度CC50大于292.83μM。本實(shí)驗(yàn)得到的化合物活性較好，細(xì)胞毒性