蒜氨酸重結(jié)晶工藝的優(yōu)化及大蒜辣素的制備.pdf

1、目的：大蒜的功效成分是蒜氨酸及經(jīng)蒜酶催化裂解產(chǎn)生的大蒜辣素等含硫化合物。新疆大蒜以含量高蒜氨酸而聞名，可作為制藥原料。本課題組已從大蒜中分別提取相對(duì)穩(wěn)定的蒜氨酸和蒜酶，并達(dá)到中試生產(chǎn)水平，正以蒜氨酸和蒜酶為原料，研制“高效大蒜新制劑”。但前期中試生產(chǎn)蒜氨酸原料含量小于90%，達(dá)不到國(guó)家一類新藥申報(bào)的要求，本研究在現(xiàn)有工藝基礎(chǔ)上進(jìn)一步優(yōu)化重結(jié)晶工藝，期望得到穩(wěn)定的蒜氨酸重結(jié)晶工藝?；钚猿煞执笏饫彼夭环€(wěn)定，在藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)中，需要在臨用前制備，

2、制備方法的一致性和可操作性直接決定了藥效學(xué)的結(jié)果準(zhǔn)確性，本研究首先需要規(guī)范蒜酶活性測(cè)定條件和方法、研究蒜氨酸/蒜酶的配比，然后確定以高含量蒜氨酸（90%）制備大蒜辣素的工藝，并在此基礎(chǔ)上考察其穩(wěn)定性，為能否制備大蒜辣素對(duì)照品提供依據(jù)。方法：1.綜合考慮蒜氨酸的含量和收率兩個(gè)因素，確定蒜氨酸（90%）重結(jié)晶工藝中溶解方法和結(jié)晶溫度，通過(guò)放大至中試水平，得到重結(jié)晶方法中蒜氨酸濃度、乙醇濃度及終產(chǎn)品蒜氨酸含量之間的關(guān)系。2.采用HPLC法以蒜

3、氨酸減少量計(jì)算蒜酶活力，考察不同含量底物蒜氨酸及催化溫度對(duì)蒜酶活力測(cè)定結(jié)果的影響。3.分別以50%和90%的蒜氨酸為原料以蒜氨酸和大蒜辣素轉(zhuǎn)化率為指標(biāo)，考察制備大蒜辣素時(shí)蒜氨酸/蒜酶的配比，確定制備大蒜辣素的條件。采用超濾法除去大分子酶，制備大蒜辣素水溶液，以HPLC法測(cè)定大蒜辣素的含量及穩(wěn)定性。結(jié)果：確定了蒜氨酸重結(jié)晶的工藝，原料先按料液比1:3用水溶解，再按料液比1:6加一定量的乙醇，在60℃的水浴中降溫結(jié)晶，用70%乙醇洗滌結(jié)晶。

4、確定了蒜氨酸濃度在45～120mg/ml，乙醇濃度在55～75%之間得到的蒜氨酸含量達(dá)到90%；確定以95%的蒜氨酸為底物，催化溫度為35℃為蒜酶活力測(cè)定的最佳方法。50%的蒜氨酸與蒜酶的配比達(dá)到1mg:17.0U時(shí)，蒜氨酸和大蒜辣素的轉(zhuǎn)化率分別為76%和65%，90%的蒜氨酸與蒜酶的配比達(dá)到1mg:17.0U時(shí)，蒜氨酸和大蒜辣素的轉(zhuǎn)化率分別為95%和100%。采用超濾離心管，低溫離心1h，離心溶液儲(chǔ)存在-20℃下，5天內(nèi)是穩(wěn)定的。采用