Treg細(xì)胞在梅毒血清固定現(xiàn)象形成中作用的研究.pdf

1、目的：探討外周血CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatory T cells，Tregs)在梅毒血清固定現(xiàn)象形成中的作用。
　　方法：從整體、細(xì)胞、分子水平三個(gè)層面探討CD4+CD25+Treg細(xì)胞在梅毒血清固定現(xiàn)象形成中的作用。整體水平：采用經(jīng)流式細(xì)胞術(shù)(flow cytometry，F(xiàn)CM)檢測(cè)28例血清固定梅毒患者和28例正常獻(xiàn)血者外周血的Treg細(xì)胞比例；細(xì)胞水平：選擇4例血清固定梅毒患者和4例正常獻(xiàn)血者，按1個(gè)患

2、者與1個(gè)正常獻(xiàn)血者配組，共4個(gè)配對(duì)組，用免疫磁珠細(xì)胞分選技術(shù)(magnetic activationcell sorting，MACS)分選出高純度的CD4+CD25+Treg細(xì)胞和CD4+CD25-細(xì)胞，按配對(duì)組逐一進(jìn)行單獨(dú)、混合培養(yǎng)(按1:1)，并采用BrdU摻入法評(píng)價(jià)Treg細(xì)胞體外抑制功能；分子水平：用Realtime-PCR及流式細(xì)胞蛋白定量技術(shù)檢測(cè)Treg細(xì)胞叉狀頭/翅膀狀螺旋轉(zhuǎn)錄因子3(forkhead/twinged h

3、elix ranscriptionfactor3，F(xiàn)OXP3)、細(xì)胞毒性T細(xì)胞相關(guān)抗原-4(cytotoxic T lymphocyteantigen-4，CTLA-4)和白介素-10(interleukin-10，IL-10)的mRNA及蛋白(protein，Pr)表達(dá)水平；最后血清梅毒固定患者組的外周血Treg細(xì)胞比例和相關(guān)細(xì)胞因子mRNA及蛋白表達(dá)水平與快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)(rapid plasmareagin circle

4、 card test，RPR)結(jié)果作相關(guān)分析。
　　結(jié)果：1.整體水平：血清固定梅毒患者外周血CD4+CD25+FOXP3+細(xì)胞、CD4+CD25+CTLA-4+細(xì)胞及CD4+CD25+IL-10+細(xì)胞比例較正常對(duì)照組顯著升高(P均(0.01)；2.細(xì)胞水平：體外細(xì)胞培養(yǎng)，加入CD4+CD25+Treg細(xì)胞后CD4+CD25-細(xì)胞增殖能力明顯受到抑制，并且來自患者組的CD4+CD25+Treg細(xì)胞抑制效率明顯高于來自對(duì)照組；3.分

5、子水平：血清固定梅毒患者組外周血CD4+CD25+Treg細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子FOXP3、CTLA-4和IL-10的mRNA表達(dá)水平均比正常對(duì)照組明顯增高(P分別為<0.01、<0.05及<0.01)，CD4+CD25+細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子FOXP3、CTLA-4、IL-10蛋白分子表達(dá)量明顯也較正常對(duì)照組顯著升高(P均<0.01)。4.血清固定梅毒患者組外周血Treg細(xì)胞比例和相關(guān)細(xì)胞因子FOXP3、CTLA-4、IL-10mRNA及蛋白表達(dá)