四株宋內(nèi)氏志賀菌的比較研究.pdf

1、志賀氏菌屬(Shigella spp.)是一類能夠通過(guò)侵襲腸上皮細(xì)胞引起患者典型性痢疾癥狀(發(fā)熱、腹痛、腹瀉)的食源性細(xì)菌。宋內(nèi)氏志賀菌(S.sonnei)是痢疾流行的主要病原菌之一。由于各個(gè)地區(qū)環(huán)境不同，宋內(nèi)氏志賀菌呈現(xiàn)很多差別。本課題通過(guò)四株來(lái)源于不同的志賀菌(S09071、S09072、S09076、S09077)的比較研究，對(duì)志賀菌致病臨床防疫以及流行病學(xué)的研究提供一定的指導(dǎo)意義。通過(guò)毒力志賀氏菌大質(zhì)粒缺失突變體庫(kù)構(gòu)建可以更好的

2、研究毒力大質(zhì)粒與染色體基因組之間的相互作用，也同時(shí)為志賀氏菌致病機(jī)理的研究打下基礎(chǔ)。
　　 論文首先對(duì)四株宋內(nèi)氏志賀菌(S.sonnei)S09071、S09072、S09076、S09077從形態(tài)、血清凝集反應(yīng)、毒力評(píng)價(jià)、生長(zhǎng)特征、生理生化特性、耐藥性六個(gè)方面做了詳細(xì)比較研究；其次我們做了毒力基因檢測(cè)、雙向電泳、全菌蛋白表達(dá)譜的比較，從分子的角度進(jìn)一步比較研究了四株菌；最后對(duì)蛋白表達(dá)圖譜的差異蛋白做了MALDI-TOF/TOF

3、質(zhì)譜鑒定。另一方面本論文還建立了志賀菌毒力大質(zhì)粒大片段敲除的方法。通過(guò)這些研究，取得了以下主要結(jié)果：
　　 (1)四株宋內(nèi)氏志賀菌形態(tài)呈直桿狀，無(wú)芽胞、莢膜、鞭毛及菌毛，菌體表面形態(tài)凹凸不平，大小為0.5～0.7×1～2μm。菌落在LB培養(yǎng)基上呈大圓形、扁平、光滑濕潤(rùn)、無(wú)色、半透明、邊緣較整齊，大小約為2.5mm。四株菌菌體和菌落形態(tài)幾乎無(wú)差別。
　　 (2)生長(zhǎng)曲線比較發(fā)現(xiàn)S09071生長(zhǎng)最快，S09076、S0907

4、7其次，S09072菌株生長(zhǎng)最慢。
　　 (3)生化特性略有差別，S09076、S09077可以利用鼠李糖、L巖糖、熊果甙、七葉靈發(fā)酵而S09071、S09072不能利用。
　　 (4)耐藥性比較發(fā)現(xiàn)S09071、S09072比S09076、S09077兩株菌有更強(qiáng)的耐藥性，其中S09072耐藥性最強(qiáng)。
　　 (5)毒力評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)只有S09072具有上皮細(xì)胞侵襲能力，而S09071、S09076、S09077則

5、沒(méi)有侵襲力。
　　 (6)毒力基因檢測(cè)發(fā)現(xiàn)S09071、S09076、S09077部分毒力相關(guān)基因發(fā)生丟失；只有S09072毒力相關(guān)基因完整。
　　 (7)通過(guò)比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究發(fā)現(xiàn)S09071、S09072全菌蛋白表達(dá)圖譜比較一致，而S09076、S09077全菌蛋白表達(dá)圖譜也趨于一致。S09071、S09072與S09076、S09077之間有48個(gè)明顯的蛋白差異點(diǎn)，質(zhì)譜鑒定得到47個(gè)分值有效的蛋白點(diǎn)，對(duì)應(yīng)了43個(gè)蛋