三種肺炎鏈球菌表面蛋白聯(lián)合誘導的特異性IgG抗體介導的免疫保護.pdf

1、在所有可通過疫苗預防的疾病中，肺炎鏈球菌疾病是導致全球5歲以下兒童死亡的首要病因。據世界衛(wèi)生組織估計全球每年約有160萬人死于各種肺炎鏈球菌疾病，其中5歲以下兒童占100萬，90％以上的死亡病例在發(fā)展中國家。肺炎鏈球菌抗生素耐藥形勢也日趨嚴峻。因此，世界衛(wèi)生組織推薦將肺炎鏈球菌疫苗納入各國家/地區(qū)的免疫規(guī)劃項目中。
　　 方法：本研究利用基因重組技術、重組蛋白原核表達技術構建，制備了肺炎鏈球菌Lpl蛋白以及第146位氨基酸缺失的

2、溶血素（Ply）。通過體外溶血試驗鑒定Ply蛋白及其突變體△A146 P1y蛋白的溶血活性；通過中和試驗和肺組織切片分析明確△A146 Ply特異性抗體的中和毒素能力和免疫原性。采用Western技術分析Ply蛋白和Lpl蛋白在不同菌株中的表達情況以獲得保守性信息。疫苗候選ClpP、Lpl、△A146 Ply蛋白單一或聯(lián)合免疫小鼠，利用鼻腔攻毒方式評價其減少細菌肺內定植的能力；利用腹腔攻毒實驗評價其對肺炎鏈球菌引起的嚴重感染敗血癥的抵抗

3、能力。利用抗體吸附試驗將產生的特異性抗體消除，并模擬被動保護實驗分析特異抗體在保護中的作用。
　　 結果：本研究成功制備△A146 Ply重組蛋白，其溶血活性全部喪失?！鰽146 Ply蛋白誘導產生的多克隆抗體能有效抑制野生Ply的溶血活性。經Western分析，Lpl和Ply在本研究所采用的12株不同血清型肺炎鏈球菌中均有表達。候選分子單一保護效果試驗顯示：Lpl、△A146 Ply、ClpP蛋白免疫后，均能使肺炎鏈球菌血清型

4、19F和14的肺內定植減少10倍以上（P<0.05）；使用強毒力的肺炎鏈球D39（血清型2型）腹腔攻毒，△A146 Ply和ClpP組小鼠的中位生存期延長。在使用D39菌株鼻腔攻毒時，ClpP和Lpl蛋白幾乎沒有保護效果；而△A146 Ply蛋白單一使用的保護效率為50％，與聯(lián)合Lpl和（或）ClpP保護效力相當。后續(xù)試驗中，我們重點評價了三種蛋白聯(lián)合使用（IC247）的有效率，使用致死劑量的14、19F、23F鼻腔攻毒，IC247有效

5、率均為100％；對于致死劑量的血清型6B鼻腔攻毒，有效率為80％；而對于由4種不同血清型所致的混合感染，IC247的有效率為70％。IC247所提供的保護效果與目前市場上使用的23價多糖疫苗和7價蛋白結合疫苗效果相當。Lpl、ClpP、△A146 P1y蛋白特異性IgG抗體缺失的IC247抗血清在被動保護實驗中不能提供保護作用。
　　 結論：三種表面蛋白具有一定的協(xié)同保護效果，IC247候選疫苗組合能有效抵抗多種血清型肺炎鏈球菌