促性腺激素釋放激素激動劑對體外培養(yǎng)子宮肌瘤肌細胞及內(nèi)膜細胞凋亡的影響.pdf

1、目的：
　　 1.檢測體外培養(yǎng)子宮肌瘤（uterine myoma）患者子宮肌瘤細胞及內(nèi)膜細胞的凋亡變化并研究促性腺激素釋放激素激動劑（gonadotropin releasing hormone agonist，GnRHa）對上述兩者凋亡的影響。
　　 2.探討子宮肌瘤的發(fā)生與細胞凋亡的關(guān)系,子宮肌瘤內(nèi)膜細胞的凋亡變化及其意義，深入研究GnRHa治療子宮肌瘤的作用機制，為發(fā)展更有效安全的臨床治療提供新的思路及實驗依據(jù)。

2、
　　 材料與方法：
　　 1.研究對象
　　 2008年1月至2009年6月在廣州醫(yī)學(xué)院附屬廣州市第一人民醫(yī)院婦科住院行子宮肌瘤切除術(shù)的有異常子宮出血癥狀的子宮肌瘤患者36例，月經(jīng)干凈后手術(shù)，術(shù)后病理檢查確診，術(shù)中切除子宮肌瘤取其瘤核標(biāo)本為研究組A，同時取同一患者子宮肌瘤周圍正常平滑肌組織為對照組A；同組患者術(shù)前分段診刮取其宮腔內(nèi)膜標(biāo)本為研究組B，其病理結(jié)果均提示增殖期內(nèi)膜，無合并子宮內(nèi)膜病變，該組患者年齡28

3、～46歲，平均（38.21±2.28）歲。
　　 選取同期因卵巢上皮性良性腫瘤行卵巢囊腫剔除術(shù)的患者22例，嚴(yán)格除外合并子宮肌瘤、子宮內(nèi)膜異位癥、炎癥及惡性腫瘤等其他疾病可能，月經(jīng)干凈后手術(shù)，術(shù)前患者知情同意情況下分段診刮取其宮腔內(nèi)膜標(biāo)本為對照組B（病理結(jié)果同樣均提示增殖期內(nèi)膜），該組患者年齡22～45歲，平均（35.23±3.32）歲。
　　 以上患者術(shù)前3個月內(nèi)未服用過激素類藥物，無其他內(nèi)分泌、免疫和代謝疾病。

4、>　　 2.實驗方法
　　 對研究組及對照組所取的細胞樣本分別進行體外培養(yǎng)，免疫組化鑒定細胞類型，確定為子宮平滑肌細胞及子宮內(nèi)膜細胞后分別用GnRHa 10－7 mol/L、10－5mol/L兩種藥物濃度作用24、48、72 h三個時間點后聯(lián)合采用脫氧核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記技術(shù)(TdT-mediated biotinylated dUTP nick end labeling,TUNEL)及流式細胞儀AnnexinV

5、-FITC/PI方法檢測各組細胞的凋亡率。
　　 3.統(tǒng)計學(xué)分析
　　 本研究結(jié)果采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件處理，組間比較用單因素方差分析，方差齊者用LSD-t法，方差不齊者用Dunnett-t法。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)果：
　　 1、GnRHa作用前，子宮肌瘤細胞（研究組A）凋亡率在各時間點均低于正常子宮平滑肌細胞（對照組A），培養(yǎng)24h時差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），培養(yǎng)4

6、8h、72h時差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），而子宮肌瘤內(nèi)膜細胞（研究組B）凋亡率在各時間點均低于正常子宮內(nèi)膜細胞（對照組B），差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），上述各組細胞都隨時間的推移凋亡率增加。
　　 2、GnRHa作用后，各組細胞的凋亡率不同程度高于作用前，且隨作用時間、濃度的增加而增加，具有時間和劑量依賴性，研究組A各時間點、藥物濃度細胞凋亡率均超過并高于同時間、藥物濃度的對照組A，培養(yǎng)24h時差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P

7、>0.05），培養(yǎng)48h、72h時差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），研究組B各時間點、藥物濃度細胞凋亡率均超過并高于同時間、藥物濃度的對照組B，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。
　　 結(jié)論：
　　 1.體外培養(yǎng)子宮肌瘤細胞的凋亡率低于正常子宮平滑肌細胞，提示凋亡調(diào)控失衡致凋亡率低可能參與了子宮肌瘤的發(fā)生和發(fā)展。
　　 2.有異常子宮出血癥狀的子宮肌瘤內(nèi)膜細胞（無合并子宮內(nèi)膜病變）的凋亡率低于正常子宮內(nèi)膜細胞，

8、子宮肌瘤內(nèi)膜細胞凋亡異常可能是子宮肌瘤的遺傳學(xué)特性所決定，但同時也可能受子宮肌瘤局部高雌、孕激素水平及各種生長因子的影響。細胞凋亡及其調(diào)控在子宮內(nèi)膜周期性脫落、出血和修復(fù)機制中起重要作用。本研究結(jié)果推測子宮肌瘤內(nèi)膜細胞凋亡異?？赡軐?dǎo)致子宮內(nèi)膜過度增厚，脫落慢或不完全，以致出血量多或時間延長，形成異常子宮出血癥狀。
　　 3.GnRHa作用后，正常子宮肌層平滑肌細胞及子宮肌瘤細胞凋亡率均有不同程度的增加，這為GnRH的自分泌/旁分