功能性消化不良十二指腸免疫激活及神經(jīng)遞質(zhì)變化的研究.pdf

1、背景與目的:
　　 功能性消化不良（functional dyspepsia，F(xiàn)D）是起源于胃、十二指腸區(qū)域，但缺乏解釋癥狀的器質(zhì)性、系統(tǒng)性或代謝性疾病證據(jù)的消化不良癥狀表現(xiàn)。包括餐后飽脹、早飽、上腹痛或燒灼感等。分為餐后不適綜合征(PDS)及上腹痛綜合征(EPS)兩種亞型。作為最普遍的功能性胃腸病之一，F(xiàn)D在全球范圍的發(fā)病率約為11％-29％。文獻(xiàn)報(bào)道，F(xiàn)D嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量，給個(gè)人和社會(huì)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。
　　

2、 迄今為止，F(xiàn)D的病因及發(fā)病機(jī)制尚不完全明確，這為FD的防治帶來了一定的困難。所以，進(jìn)一步認(rèn)識(shí)FD的疾病本質(zhì)，深入研究其發(fā)病機(jī)制，指導(dǎo)臨床診治，具有重要的社會(huì)意義和科學(xué)價(jià)值。因此，目前FD一直是消化系統(tǒng)疾病領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)之一。
　　 目前認(rèn)為，十二指腸可能是功能性胃腸病癥狀產(chǎn)生的關(guān)鍵部位。感染后功能性消化不良(PI-FD)和十二指腸局部T細(xì)胞的持續(xù)增多、CD4+細(xì)胞的減少以及巨噬細(xì)胞的增加等免疫因素有關(guān)。作為胃腸粘膜中的重要的免

3、疫細(xì)胞，嗜酸粒細(xì)胞和肥大細(xì)胞對(duì)胃腸功能具有重要的調(diào)節(jié)作用。嗜酸粒細(xì)胞脫顆?？梢詫?dǎo)致神經(jīng)刺激和平滑肌收縮，進(jìn)而產(chǎn)生胃腸道癥狀，如腹痛和腹脹。肥大細(xì)胞可以釋放多種介質(zhì)如5-羥色胺(5-HT)、一氧化氮(NO)、血管活性腸肽(VIP)等調(diào)節(jié)胃腸道運(yùn)動(dòng)及內(nèi)臟感覺。迄今為止，對(duì)于FD十二指腸免疫細(xì)胞如嗜酸粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞變化的研究國外有少許報(bào)道，國內(nèi)尚未見相關(guān)研究。
　　 有研究表明，F(xiàn)D患者存在食物過敏，并常伴有焦慮、抑郁、神經(jīng)質(zhì)、慢性

4、緊張、敵對(duì)、疑病心理、悲觀傾向等心理社會(huì)障礙，并存在異常就醫(yī)行為。目前認(rèn)為各種應(yīng)激因素作用于大腦的應(yīng)激反應(yīng)系統(tǒng)，通過腦-腸軸的雙向調(diào)節(jié)作用于胃腸道靶器官，使胃腸道運(yùn)動(dòng)、感覺、分泌和免疫功能發(fā)生變化，兩者相互作用、相互影響而表現(xiàn)為功能性胃腸病。食物過敏及心理應(yīng)激在促發(fā)FD癥狀的過程中都涉及免疫機(jī)制。這一過程是否涉及十二指腸粘膜中的嗜酸粒細(xì)胞及肥大細(xì)胞尚不清楚。
　　 FD患者存在十二指腸的動(dòng)力異常、十二指腸對(duì)酸的異常反應(yīng)以及十二指

5、腸對(duì)脂類的異常反應(yīng)。有研究表明，F(xiàn)D十二指腸功能異常的機(jī)制可能涉及腸神經(jīng)系統(tǒng)，如在十二指腸對(duì)酸的異常反應(yīng)中，H+可以激活酸的感受器如十二指腸傳入神經(jīng)的香草素1受體，繼之釋放降鈣素基因相關(guān)肽（CGRP）及一氧化氮。而CCK-A受體拮抗劑氯谷胺可以緩解十二指腸內(nèi)脂類灌注所誘發(fā)的消化不良癥狀，表明CCK可能在十二指腸內(nèi)脂肪誘發(fā)胃的高敏感性中起到關(guān)鍵性的作用。在功能性胃腸病腦腸軸的網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié)中，中樞神經(jīng)與腸神經(jīng)系統(tǒng)中的多種神經(jīng)遞質(zhì)對(duì)胃腸道動(dòng)力及感

6、覺起到重要的調(diào)節(jié)作用。一氧化氮(NO)及血管活性腸肽(VIP)是腦腸肽中主要的抑制性介質(zhì)，在一些疾病狀態(tài)下，胃竇肌層ENS中一氧化氮及血管活性腸肽含量升高，導(dǎo)致胃竇收縮減弱、胃排空延遲。在人類的腸道中存在酶、非酶和細(xì)菌產(chǎn)生的NO。兩種結(jié)構(gòu)型鈣依賴的NO合酶亞型負(fù)責(zé)少量NO的生成:神經(jīng)型NOS（nNOS，Ⅰ型）和內(nèi)皮的NO合酶（eNOS，Ⅲ型）。誘導(dǎo)型NOS(iNOS)的誘導(dǎo)作用往往發(fā)生在炎癥或者免疫激活的狀態(tài)下。在腸道中，炎癥、上皮、血

7、管內(nèi)皮和神經(jīng)細(xì)胞都可以表達(dá)iNOS，5-羥色胺和P物質(zhì)則對(duì)胃十二指腸動(dòng)力起到興奮作用，并在胃腸道內(nèi)臟感覺的調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要的作用。腸神經(jīng)系統(tǒng)遞質(zhì)的失調(diào)可能是功能性消化不良的重要機(jī)制。那么，F(xiàn)D患者十二指腸是否存在免疫激活，其粘膜中iNOS的表達(dá)如何，F(xiàn)D患者所存在的胃腸動(dòng)力及感覺的異常是否與十二指腸中各種神經(jīng)遞質(zhì)的異常表達(dá)有關(guān)？目前為止，僅有研究報(bào)道了FD患者胃神經(jīng)遞質(zhì)的變化，而十二指腸中上述幾種神經(jīng)遞質(zhì)變化的研究尚未見報(bào)道。
　　

8、 本研究的目的在于了解FD患者十二指腸粘膜免疫細(xì)胞的變化，探尋食物過敏、心理應(yīng)激與FD癥狀及十二指腸免疫細(xì)胞變化的相關(guān)性，探討FD十二指腸粘膜中神經(jīng)遞質(zhì)表達(dá)的異常以及其與FD癥狀、十二指腸免疫細(xì)胞之間的相關(guān)性，以初步闡明FD與十二指腸神經(jīng)免疫內(nèi)分泌網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié)的關(guān)聯(lián)，為FD發(fā)病機(jī)制的研究開辟新的思路。
　　 方法:
　　 1.對(duì)48例FD患者（PDS23例，EPS25例）和21例健康志愿者進(jìn)行研究，胃鏡鉗取十二指腸球部及降

9、段粘膜組織，H-E染色并計(jì)數(shù)粘膜嗜酸粒細(xì)胞，甲苯胺藍(lán)染色計(jì)數(shù)肥大細(xì)胞總數(shù)及活化比率，主要堿性蛋白(MBP)免疫組織化學(xué)標(biāo)記嗜酸粒細(xì)胞脫顆粒。
　　 2.48例FD患者（PDS23例，EPS25例）和21例健康志愿者采外周靜脈血，應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附方法，進(jìn)行血清14種食物過敏原的特異性抗體IgG的檢測(cè)。
　　 3.應(yīng)用醫(yī)院焦慮抑郁量表(HADS)對(duì)48例FD患者（PDS23例，EPS25例）和21例健康志愿者進(jìn)行精神心理因素

10、分析，對(duì)患者進(jìn)行焦慮和抑郁評(píng)分(HADS-A、HADS-D)。
　　 4.應(yīng)用直線相關(guān)分析食物過敏原特異性抗體IgG種類、IgG積分以及焦慮抑郁評(píng)分與十二指腸粘膜肥大細(xì)胞計(jì)數(shù)、脫顆粒比率及嗜酸粒細(xì)胞計(jì)數(shù)、主要堿性蛋白與FD癥狀積分的相關(guān)性以及食物過敏原特異性抗體IgG種類、IgG積分以及焦慮抑郁評(píng)分與十二指腸粘膜肥大細(xì)胞計(jì)數(shù)、脫顆粒比率及嗜酸粒細(xì)胞計(jì)數(shù)之間的相關(guān)性。
　　 5.免疫組織化學(xué)檢測(cè)48例FD患者和21例健康志

11、愿者十二指腸神經(jīng)遞質(zhì)5-羥色胺(5-HT)、P物質(zhì)(SP)、一氧化氮(NO)、血管活性腸肽(VIP)的表達(dá)，據(jù)免疫陽性細(xì)胞數(shù)分級(jí)和免疫陽性顯色強(qiáng)度分級(jí)計(jì)算免疫組化積分;分析神經(jīng)遞質(zhì)與FD癥狀積分及十二指腸免疫細(xì)胞的相關(guān)性。
　　 結(jié)果:
　　 1.FD及其兩種亞型PDS及EPS十二指腸降段粘膜五個(gè)高倍鏡視野中嗜酸粒細(xì)胞計(jì)數(shù)分別為23.23±5.18、22.65±5.81、23.76±4.58，顯著高于正常對(duì)照組(P＜0.

12、05); FD及PDS、EPS中，主要堿性蛋白的表達(dá)與正常對(duì)照均無顯著差異(P＞0.05)，F(xiàn)D及PDS、EPS中，存在十二指腸降段粘膜嗜酸粒細(xì)胞脫顆粒的患者比例分別為26/48、12/23、14/25，顯著高于正常對(duì)照組（P＜0.05）;十二指腸球部及降段嗜酸粒細(xì)胞計(jì)數(shù)與FD癥狀積分無相關(guān)性，十二指腸降段主要堿性蛋白免疫組化積分與上腹燒灼癥狀積分呈正相關(guān)(r=0.528，P=0.024)。
　　 2.FD及其兩種亞型PDS、E

13、PS十二指腸球部粘膜肥大細(xì)胞數(shù)分別為120.94±13.31、121.00±13.75、120.88±13.13，顯著高于正常對(duì)照組（P＜0.01）;FD及PDS、EPS十二指腸降段粘膜肥大細(xì)胞數(shù)分別為123.28±13.40、124.32±16.53、122.24±9.54，顯著高于正常對(duì)照組(P＜0.001);FD及PDS、EPS十二指腸球部粘膜肥大細(xì)胞脫顆粒比率(％)分別為60.23±5.10、59.84±4.50、60.58±5

14、.66，顯著高于正常對(duì)照組(P＜0.001); FD及PDS、EPS十二指腸降段粘膜肥大細(xì)胞脫顆粒比率(％)分別為66.97±5.30、66.63±5.37、67.28±5.32，顯著高于正常對(duì)照組（P＜0.01）。十二指腸球部、降段粘膜肥大細(xì)胞計(jì)數(shù)及脫顆粒比率與FD癥狀積分之間無相關(guān)性(P＞0.05)。
　　 3.PDS患者牛肉、雞肉、蟹、蝦、小麥的特異性抗體IgG陽性率較對(duì)照組顯著增高(牛肉:15/23，P＜0.001;雞肉

15、:17/23，P＜0.001;蟹:20/23，P＜0.001;蝦:10/23，P=0.009;小麥:8/23，P=0.036); EPS患者牛肉、雞肉、大豆的特異性抗體IgG陽性率較對(duì)照組顯著增高（牛肉:14/25，P=0.003;雞肉:14/25，P＜0.001;大豆:18/25，P＜0.001）;FD及兩種亞型PDS、EPS食物過敏原特異性抗體IgG評(píng)分分別為6.69±4.73、6.96±5.09、6.43±4.46，顯著高于健康對(duì)

16、照組(P＜0.001)，F(xiàn)D及兩種亞型PDS、EPS食物過敏原特異性抗體IgG種類分別為3.89±2.62、4.19±2.83、3.60±2.42，顯著高于健康對(duì)照組(P＜0.01)。
　　 4.FD患者的食物過敏原特異性抗體IgG陽性總評(píng)分及食物過敏原特異性抗體IgG陽性種類與FD上腹脹、早飽、上腹痛、上腹燒灼癥狀積分均無相關(guān)性(P＞0.05);FD患者食物過敏原特異性抗體IgG評(píng)分與十二指腸球部肥大細(xì)胞計(jì)數(shù)(r=0.247，

17、P=0.038)及脫顆粒比率(r=0.307，P=0.011)呈正相關(guān);FD患者食物過敏原特異性抗體IgG種類與十二指腸球部肥大細(xì)胞計(jì)數(shù)（r=0.243，P=0.041）及脫顆粒比率(r=0.326，P=0.007)呈正相關(guān)。
　　 5.FD及兩種亞型PDS、EPS焦慮積分較健康對(duì)照組顯著增高（FD:6.92±5.51，P=0.001; PDS:7.00±5.46，P=0.032; EPS:7.35±5.41，P=0.018）;

18、FD及兩種亞型PDS、EPS抑郁積分較健康對(duì)照組顯著增高(FD:7.19±5.12，P=0.005; PDS:7.31±5.28，P=0.023; EPS:7.08±5.05，P=0.035); HADS-A與上腹脹、早飽、上腹燒灼癥狀積分呈正相關(guān)(P＜0.05)，HADS-D與上腹脹、早飽癥狀積分呈正相關(guān)(P＜0.05)。
　　 6.FD患者焦慮積分與十二指腸球部、十二指腸降段粘膜肥大細(xì)胞計(jì)數(shù)（球部:r=0.843，P=0.0

19、00;降段:r=0.612，P=0.002）、脫顆粒比率（球部:r=0.714，P=0.000;降段:r=0.734，P=0.000）呈正相關(guān);FD患者抑郁積分與十二指腸球部、十二指腸降段粘膜肥大細(xì)胞計(jì)數(shù)（球部:r=0.654，P=0.001;降段:r=0.476，P=0.025）、脫顆粒比率（球部:r=0.461，P=0.031;降段:r=0.530，P=0.011）呈正相關(guān)。
　　 7.PDS組十二指腸球部的iNOS表達(dá)增強(qiáng)

20、，其iNOS免疫組化積分明顯高于正常對(duì)照組(P＜0.05)。PDS組十二指腸降段的iNOS表達(dá)較正常對(duì)照組無顯著性差異(P＞0.05)，EPS組十二指腸球部及十二指腸降段iNOS的表達(dá)較正常對(duì)照組無顯著性差異(P＞0.05);PDS、EPS組十二指腸球部及十二指腸降段5-HT的表達(dá)均較正常對(duì)照組無顯著性差異(P＞0.05);PDS、EPS組十二指腸球部及十二指腸降段SP的表達(dá)均較正常對(duì)照組無顯著性差異(P＞0.05); PDS、EPS組

21、十二指腸球部及十二指腸降段VIP的表達(dá)均較正常對(duì)照組無顯著性差異（P＞0.05）。
　　 8.FD患者十二指腸球部iNOS表達(dá)與FD患者上腹脹癥狀積分呈正相關(guān)（r=0.496，P=0.003），與早飽、上腹痛、上腹燒灼癥狀積分無相關(guān)性（P＞0.05），F(xiàn)D患者十二指腸球部iNOS表達(dá)與十二指腸球部嗜酸粒細(xì)胞計(jì)數(shù)及肥大細(xì)胞計(jì)數(shù)均無相關(guān)性（P＞0.05），與十二指腸球部肥大細(xì)胞脫顆粒比率呈正相關(guān)(r=0.321，P=0.008)。<

22、br>　　 結(jié)論:
　　 1.FD存在十二指腸免疫激活，十二指腸降段粘膜嗜酸粒細(xì)胞、十二指腸球部及降段粘膜肥大細(xì)胞可能參與了FD的發(fā)病。
　　 2.FD患者存在食物過敏，食物過敏原特異性抗體IgG可能在FD的發(fā)病中發(fā)揮作用。
　　 3.FD患者存在精神心理因素異常。
　　 4.食物過敏、焦慮和抑郁可能是FD患者十二指腸免疫激活的始動(dòng)因素。
　　 5.十二指腸球部iNOS可能與PDS的發(fā)病機(jī)制有關(guān)

23、。
　　 6.FD患者十二指腸球部iNOS表達(dá)增強(qiáng)可能與肥大細(xì)胞活化有關(guān)。
　　 研究意義:
　　 本研究探尋了FD患者十二指腸粘膜免疫細(xì)胞的變化、食物過敏、心理應(yīng)激因素與十二指腸肥大細(xì)胞、嗜酸粒細(xì)胞的相關(guān)性，并探尋了FD不同亞型間十二指腸腸神經(jīng)遞質(zhì)的異常變化，探討了十二指腸免疫激活在FD發(fā)病機(jī)制中的作用以及免疫激活的始動(dòng)因素，并探討了神經(jīng)內(nèi)分泌異常在FD發(fā)病中的作用，為探索FD的診治策略提供了新的線索及思路，具