FTO基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島甲基化與巨大兒發(fā)生的表觀遺傳流行病學(xué)研究.pdf

1、背景:巨大兒(Macrosomia)是指出生體重≥4000g的活產(chǎn)新生兒，目前國(guó)內(nèi)外巨大兒的發(fā)生率呈顯著上升趨勢(shì)?？焖僭鲩L(zhǎng)的巨大兒發(fā)生率，不僅增加了母嬰產(chǎn)科損傷的機(jī)會(huì)，而且還會(huì)增加多種兒童腫瘤及一些成年性疾病如肥胖、糖尿病、高血壓、冠心病等的風(fēng)險(xiǎn)。巨大兒的發(fā)生是遺傳和環(huán)境共同作用的結(jié)果，但其詳細(xì)的分子機(jī)制仍然不清楚。近年來(lái)表觀遺傳學(xué)(epigenetics)的迅速發(fā)展以及在胚胎發(fā)育和其他疾病研究中所取得巨大成就，為巨大兒病因?qū)W研究提供了

2、新的思路和方法。表觀遺傳學(xué)是研究遺傳與環(huán)境交互作用的良好手段。FTO(Fat massand obesity-associated)基因在胎兒以及成人組織中廣泛表達(dá)，其功能與肥胖的發(fā)生、發(fā)展有密切關(guān)聯(lián)。人與動(dòng)物實(shí)驗(yàn)均表明胎盤(pán)FTO表達(dá)與胚胎發(fā)育和胎兒娩出后生長(zhǎng)有關(guān)聯(lián)，同時(shí)FTO基因的功能還受到表觀遺傳變異的調(diào)控。但是，在巨大兒的發(fā)生中是否涉及FTO表達(dá)的變化，這種變化是否涉及表觀遺傳變異調(diào)控均不清楚。因此本研究擬探討FTO基因甲基化變化

3、與巨大兒發(fā)生的關(guān)聯(lián)性，分析甲基化與其它環(huán)境因素對(duì)巨大兒發(fā)生的共同影響。
　　方法:采用成組病例對(duì)照研究方法，研究對(duì)象來(lái)自2012年1月～2012年12月在溫州醫(yī)科大學(xué)附屬育英兒童醫(yī)院產(chǎn)科分娩的新生兒及母親。入選標(biāo)準(zhǔn):正常妊娠、單胎足月分娩、糖耐量試驗(yàn)評(píng)價(jià)正常、新生兒無(wú)先天畸形的新生兒和產(chǎn)婦。排除標(biāo)準(zhǔn)包括糖尿病妊娠、過(guò)期妊娠、有妊娠合并癥者（如糖尿病、高血壓、心臟病等）、有妊娠并發(fā)癥者（如胎盤(pán)異常、先兆子癇等）、新生兒有先天畸形。胎

4、兒娩出后立即稱重，按出生體重分為巨大兒組(≥4000g)和正常出生體重組（2500g～3999g，對(duì)照組）。收集母親妊娠期相關(guān)因素和新生兒發(fā)育狀況，以及胎盤(pán)和臍血標(biāo)本。采用Methprimer預(yù)測(cè)FTO基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島，飛行時(shí)間質(zhì)譜法(MALDI-TOF-MS)對(duì)CpG島內(nèi)的甲基化位點(diǎn)進(jìn)行甲基化水平的定量檢測(cè)。采用二分類logistic回歸模型分析影響巨大兒發(fā)生的相關(guān)因素，統(tǒng)計(jì)軟件為SPSS14.0。
　　結(jié)果:
　　1

5、.基線資料比較:共收集到巨大兒63例，正常出生體重兒72例。兩組基線資料比較顯示，巨大兒組中母親孕前體重（P=0.007）、孕前體質(zhì)指數(shù)(BMI)(P=0.008)、妊娠周數(shù)(P=0.004)和胎兒男性比例(74.6％vs52.8％，P=0.013)顯著高于對(duì)照組。其他因素如母親分娩時(shí)年齡、母親身高、孕期體重增加量和產(chǎn)次在兩組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　2.FTO基因甲基化分析:FTO基因啟動(dòng)子區(qū)有1個(gè)CpG島，長(zhǎng)度是290bp，共有2

6、3個(gè)CpG位點(diǎn)。甲基化檢測(cè)結(jié)果顯示，兩組間CpG島平均甲基化率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（臍血:P=0.065和胎盤(pán)P=0.283）。但臍血中CpG6,7，8，9位點(diǎn)甲基化率在巨大兒組低于對(duì)照組（7.0％ vs8.0％，P=0.004），胎盤(pán)中CpG16位點(diǎn)也顯示同樣趨勢(shì)(0％vs1％，P=0.048)。此外，兩組均顯示臍血中平均甲基化率和單個(gè)CpG位點(diǎn)甲基化率（除CpG2和CpG15位點(diǎn)）都低于胎盤(pán)中的甲基化率（P＜0.001到P=0.038)。<

7、br>　　3.FTO基因表達(dá)分析:胎盤(pán)組織中FTO基因的表達(dá)水平在巨大兒組是1.33±0.59，對(duì)照組為1.05±0.43，兩組比較差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.010)，顯示在巨大兒組高于對(duì)照組。
　　4.影響因素分析:單因素logistic回歸分析顯示，母親年齡、孕前BMI、孕期體重增加量、胎兒性別、妊娠周數(shù)、產(chǎn)次、FTO胎盤(pán)表達(dá)量及臍血CpG6,7，8，9甲基化率與巨大兒發(fā)生有關(guān)聯(lián)。進(jìn)一步多因素分析顯示，孕周越長(zhǎng)分娩巨大兒的風(fēng)險(xiǎn)

8、越高，OR值為1.86（95％CI:1.21-2.84）;母親孕前BMI每增加1個(gè)單位，分娩巨大兒的風(fēng)險(xiǎn)增加1.21倍(95％CI:1.02-1.44);胎盤(pán)FTO基因表達(dá)量的OR:3.54;95％ CI:1.25-10.03，臍血FTO基因CpG6,7,8，9位點(diǎn)和胎盤(pán)中CpG16甲基化率增加，巨大兒發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)下降，OR值分別為0.77（95％CI:0.61-0.96）和0.68(95％CI:0.48-0.97)，其他因素未見(jiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異