成分A008的化學(xué)分離及預(yù)防肥胖的活性研究.pdf

1、荷葉為睡蓮科植物蓮（Nelumbo nucifera Gaertn.）的干燥葉，具有清熱解暑、升發(fā)清陽、涼血止血之功效。荷葉中含有豐富的黃酮類、生物堿類、有機酸類及揮發(fā)油類成份，其中黃酮類、生物堿類是荷葉現(xiàn)在研究的主要有效部位，其降脂減肥活性倍受人們的關(guān)注。 目的：從荷葉中分離成分A008，并考察其對3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖與凋亡的影響及對營養(yǎng)型肥胖大鼠體重增長的預(yù)防作用。 方法：采用大孔吸附樹脂法獲取荷葉總提取物；回

2、流提取法精制總提取物，在考察提取溶劑種類、提取時間、溶劑用量等單因素的基礎(chǔ)上，采用正交設(shè)計法優(yōu)化提取工藝條件；進一步采用硅膠柱層析法、重結(jié)晶方法分離純化成分A008。MTT法測定成分A008對3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖的影響，AnnexinⅤ-FITC/PI染色法觀察成分A008對其凋亡的影響，流式細(xì)胞術(shù)定量檢測CyclinD1細(xì)胞周期蛋白的表達(dá)。建立營養(yǎng)性大鼠肥胖模型，同時灌胃給予成分A008，考察成分A008對營養(yǎng)性肥胖大鼠的體重和

3、體脂指標(biāo)的影響，同時檢測大鼠主要臟器系數(shù)的大小，考察成分A008預(yù)防營養(yǎng)型肥胖大鼠的體重增加的活性，并對其進行毒性評價。 結(jié)果：本實驗大孔吸附樹脂法提取荷葉總提取物；得到的洗脫物用25倍量的甲醇回流提取2次，每次2h；得到的提取物用硅膠柱層析法進行分離，用石油醚:乙酸乙酯進行梯度洗脫，在石油醚:乙酸乙酯=8:1時分離得到成分A008；采用甲醇對該組分進行重結(jié)晶，純度達(dá)到99.99％。本實驗發(fā)現(xiàn)成分A008明顯抑制3T3-L1前脂

4、肪細(xì)胞的增殖，且具有濃度依賴性和時間依賴性；同時成分A008 能促進3T3-L1 前脂肪細(xì)胞的凋亡，該作用亦具有濃度依賴性。且檢測到成分A008上調(diào)CyclinD1蛋白的表達(dá)成分A008 高劑量組能夠明顯抑制營養(yǎng)型肥胖大鼠體重的增加，降低其Lee’s指數(shù)及脂肪重量，且對各主要臟器重量沒有明顯毒性作用，說明治療劑量的成分A008能預(yù)防營養(yǎng)型肥胖大鼠體重的增加且對大鼠各主要臟器無明顯的毒副作用。 結(jié)論：本實驗在以往荷葉荷葉總提取物提

5、取的基礎(chǔ)上加以改進，縮短了實驗周期，簡化了實驗過程，避免了多種毒性較大的有機溶劑的使用，研究了成分A008對3T3-L1前脂肪細(xì)胞抑制增殖、促進凋亡的作用，和預(yù)防營養(yǎng)型肥胖大鼠體重增加的活性，為成分A008進一步的預(yù)防肥胖作用機理的研究和體內(nèi)藥物代謝的研究提供了可靠的實驗依據(jù)。目前，研制安全、有效、質(zhì)量可控、作用機理明確的預(yù)防和治療肥胖、高脂血癥的藥物是藥物學(xué)研究熱點之一，能夠簡便、高效地進行生產(chǎn)是藥物工業(yè)化生產(chǎn)的主要目標(biāo)。故本實驗又為