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1、[目的]:考察急性應(yīng)激誘導(dǎo)大鼠海馬Akt/FKHRL1信號通路活性的改變及其時效性;探討心理應(yīng)激的大鼠模型。
[材料和方法]:1.實驗動物:雄性SD大鼠,體重280±20g,每籠5只于動物房常規(guī)飼養(yǎng)。2.實驗試劑:①一次抗體[P-Akt(Ser-473)、Akt(Ser-473)、P-FKHRL1(Thr-32)、FKHRL1(Thr-32)],羊抗兔多克隆二次抗體;②增強型化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)(enhancedchemilumi
2、nescentsystem,ECL)試劑盒;③大鼠ACTH放免試劑盒。3.實驗方法:所有動物在飼養(yǎng)七天后隨機分配為正常對照組(C)、軀體應(yīng)激組(S)和心理應(yīng)激組(PS)。對S組建立急性足底應(yīng)激模型,對PS組通過讓其看和聽到同伴的應(yīng)激制造心理應(yīng)激模型,觀察急性應(yīng)激后大鼠海馬Akt/FKHRL1信號通路的活性改變情況和其變化的時效性及應(yīng)激后血漿促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)的動態(tài)變化,并與對照組相比較。Akt/FKHRL1信號通路的活性用蛋白
3、質(zhì)印跡(Westernblotting)方法測定其磷酸化水平。用放射免疫方法測定血漿ACTH濃度。用SPSS16.0統(tǒng)計軟件對實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析,血漿ACTH濃度及Akt/FKHRL信號系統(tǒng)表達(dá)程度皆用單因素方差分析進(jìn)行檢驗。以P<0.05為判斷差異顯著性的標(biāo)準(zhǔn)。
[結(jié)果]遭遇足底電擊的大鼠表現(xiàn)為明顯的ACTH改變(P<0.001),說明應(yīng)激造模是成功的,但Akt/FKHRL1信號系統(tǒng)活性未表現(xiàn)出統(tǒng)計學(xué)上的變化。心理應(yīng)激
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