伯氏疏螺旋體誘導(dǎo)大鼠類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎模型的建立及類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎與TNFAIP3基因的關(guān)聯(lián)研究.pdf

1、本文主要從以下幾個(gè)部分展開論述:
　　第一部分 伯氏疏螺旋體誘導(dǎo)大鼠類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎模型的建立
　　背景:類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（Rheumatoid Arthritis，RA）是一類慢性炎性自身免疫性疾病，主要以滑膜增生，關(guān)節(jié)疼痛，關(guān)節(jié)腫脹，關(guān)節(jié)軟骨及骨質(zhì)破壞為特征，病變主要累及雙手近端指間關(guān)節(jié)，也可發(fā)生于腕、足等小關(guān)節(jié)，病變呈對(duì)稱性分布。其發(fā)病機(jī)制至今仍未明確，一般認(rèn)為其發(fā)病和遺傳、感染、自身免疫及環(huán)境因素相關(guān)。淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、

2、巨噬細(xì)胞及滑膜細(xì)胞等多種炎癥細(xì)胞介導(dǎo)的異常細(xì)胞免疫、體液免疫，導(dǎo)致關(guān)節(jié)局部和全身的免疫功能紊亂，細(xì)胞因子如腫瘤壞死因子α(Tumor necrosis factorα，TNF-α)、白介素-1β（interleukin-1，IL-1β）、白介素-6(interleukin-1，IL-6)、白介素-17(interleukin-17，IL-17)等在關(guān)節(jié)炎癥的發(fā)生、發(fā)展過程中扮演著重要角色。RA的動(dòng)物模型主要用于研究RA的發(fā)病機(jī)制和治療途

3、徑。目前研究RA的動(dòng)物模型有多種，最主要的是佐劑性關(guān)節(jié)炎(adjuvant arthritis，AA)和膠原性關(guān)節(jié)炎(collagen typeⅡinduced arthritis，CIA)。伯氏疏螺旋體是萊姆病的病原體，中期和晚期萊姆病以萊姆關(guān)節(jié)炎、神經(jīng)系統(tǒng)損害及心臟病變?yōu)橹饕憩F(xiàn)，其中萊姆關(guān)節(jié)炎發(fā)生率最高，約半數(shù)以上的患者有關(guān)節(jié)癥狀，多進(jìn)展為慢性炎性關(guān)節(jié)炎并可致殘。萊姆關(guān)節(jié)炎在臨床及病理表現(xiàn)上與RA和反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎有許多相似處，因而可

4、將其用于關(guān)節(jié)炎發(fā)病機(jī)制的研究。目前，常被用作萊姆病動(dòng)物模型的大白鼠為近交系Lewis、CD-1、SD等品系。其中，Lewis和CD-1品系比較敏感，感染后可發(fā)生心肌炎及關(guān)節(jié)炎。萊姆關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型的制作是通過向?qū)嶒?yàn)動(dòng)物皮下或腹腔注射伯氏疏螺旋體活菌誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎。研究發(fā)現(xiàn)，在宿主感染螺旋體后，螺旋體數(shù)量迅速下降。在螺旋體數(shù)量下降的同時(shí)關(guān)節(jié)炎也逐漸減輕，只有再次感染螺旋體機(jī)體才會(huì)出現(xiàn)較強(qiáng)的免疫應(yīng)答并出現(xiàn)破壞性關(guān)節(jié)炎。Gondolf KB等[16

5、]研究證實(shí)，通過向大鼠關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射丁醇萃取的水溶性的伯氏疏螺旋體多種外膜表面蛋白的復(fù)合蛋白，可以誘發(fā)大鼠慢性關(guān)節(jié)炎。以上研究說明，伯氏疏螺旋體全菌蛋白的整體或部分可能誘導(dǎo)大鼠關(guān)節(jié)炎，為了探索這種可能性，本實(shí)驗(yàn)使用伯氏疏螺旋體全菌蛋白聯(lián)合不完全弗氏佐劑免疫雄性Lewis近交系大鼠，嘗試建立一種新的RA動(dòng)物模型。
　　目的:應(yīng)用伯氏疏螺旋體（Borrelia burgdorferi）全菌蛋白(Whole cell protein)首次

6、皮內(nèi)注射再次腹腔注射免疫Lewis大鼠誘導(dǎo)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎模型并探討該模型發(fā)病機(jī)制。
　　方法:將雄性Lewis大鼠隨機(jī)分為螺旋體低劑量組、螺旋體中等劑量組、螺旋體高劑量組、完全弗氏佐劑組、不完全弗氏佐劑組及生理鹽水組。采用關(guān)節(jié)炎指數(shù)和組織病理學(xué)的方法觀察大鼠的發(fā)病程度和病理特點(diǎn)。雙抗體夾心ELISA法檢測血清RF、TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-17含量。免疫組織化學(xué)法檢測滑膜MMP3、TIMP1的表達(dá)。
　　結(jié)果:伯

7、氏疏螺旋體誘導(dǎo)的大鼠關(guān)節(jié)炎模型，于造模后第16天，螺旋體高劑量組大鼠造模率66.67％。病變關(guān)節(jié)病理顯示關(guān)節(jié)滑膜增生，炎細(xì)胞浸潤，軟骨組織及骨組織侵蝕，呈典型的關(guān)節(jié)炎病變。螺旋體高劑量組成模大鼠與完全弗氏佐劑組比較，大鼠血清細(xì)胞因子水平、關(guān)節(jié)炎指數(shù)、關(guān)節(jié)組織病理學(xué)評(píng)分及MMP3和TIMP1的免疫組化IHS評(píng)分差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＞0.05）;與不完全弗氏佐劑和生理鹽水組比較，大鼠血清細(xì)胞因子水平、關(guān)節(jié)炎指數(shù)、關(guān)節(jié)組織病理學(xué)評(píng)分及MMP

8、3和TIMP1的免疫組化IHS評(píng)分差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＜0.05)。
　　結(jié)論:1.足跖皮內(nèi)注射6mg/ml伯氏疏螺旋體全菌蛋白0.1ml，兩周后再次以相同劑量相同濃度腹腔注射加強(qiáng)免疫1次，可誘導(dǎo)Lewis大鼠類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎模型，造模率可達(dá)66.67％。
　　2.伯氏疏螺旋體全菌蛋白誘導(dǎo)大鼠類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎模型的血清RF、TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-17水平升高。
　　3.伯氏疏螺旋體全菌蛋白誘導(dǎo)大鼠類風(fēng)濕關(guān)節(jié)

9、炎模型的滑膜MMP3表達(dá)增加，TIMP1表達(dá)減少。
　　關(guān)鍵詞:全菌蛋白;伯氏疏螺旋體;關(guān)節(jié)炎;類風(fēng)濕;模型;動(dòng)物;自身免疫
　　第二部分 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎與TNFAIP3基因多態(tài)性關(guān)聯(lián)研究的Meta分析
　　背景:類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(Rheumatoid Arthritis，RA)是一種慢性進(jìn)行性自身免疫性疾病，環(huán)境因素和遺傳因素在疾病的發(fā)生和發(fā)展過程中共同起作用，遺傳因素可能是RA的發(fā)病基礎(chǔ)。近年腫瘤壞死因子誘導(dǎo)蛋白3(tu

10、mor necrosis factoralpha induced protein3，TNFAIP3)基因被認(rèn)為是HLA以外與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎關(guān)聯(lián)性極強(qiáng)的一個(gè)易感基因。其編碼的泛素化蛋白A20通過調(diào)節(jié)核因子（Nuclear factor kappa B，NF-kappaB/NF-(e)B）、干擾素調(diào)節(jié)因子3(Interferonregulate factor3，IRF3)及腫瘤壞死因子（Tumor necrosis factor，TNF）誘導(dǎo)

11、凋亡信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路上多個(gè)部分的泛素化狀態(tài)，包含腫瘤壞死因子受體(TNFreceptor)及Toll樣受體(Toll-like receptor)和Nod樣受體(Nod-like receptor)等，限制并終止炎癥反應(yīng)。2007年威康信托基金會(huì)病例控制協(xié)會(huì)(WTCCC)全基因組研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤壞死因子誘導(dǎo)蛋白3基因rs6920220和rs10499194位點(diǎn)基因多態(tài)性與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎有關(guān)聯(lián)，此后有關(guān)TNFAIP3的研究日益增多，但研究結(jié)論不盡

12、一致。
　　目的:探討類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)與TNFAIP3基因多態(tài)性的關(guān)聯(lián)性。
　　方法:選擇TNFAIP3基因6個(gè)位點(diǎn)(rs6920220、rs2230926、rs5029937、rs10499194、rs2327832、rs13207033)，檢索已發(fā)表的RA與TNFAIP3基因多態(tài)性關(guān)聯(lián)研究的文獻(xiàn)進(jìn)行Meta分析。
　　結(jié)果:18篇文獻(xiàn)共納入27554例RA患者和39664例正常對(duì)照。綜合分析顯示，TNFAIP3

13、基因rs6920220、rs2230926、rs5029937位點(diǎn)基因多態(tài)性與RA存在關(guān)聯(lián)性（P＜0.01，P=0.03，P＜0.01）;TNFAIP3基因rs2327832和rs13207033位點(diǎn)基因多態(tài)性與RA無關(guān)聯(lián)性（P=0.27，P=0.05）。亞組分析顯示，白種人TNFAIP3基因rs10499194位點(diǎn)基因多態(tài)性與RA存在關(guān)聯(lián)性[OR=0.87(0.80～0.95)，P＜0.01];黃種人TNFAIP3基因rs104991