實驗性氟中毒中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥損傷機制中NF-B信號通路改變的作用.pdf

1、目的：觀察慢性氟中毒動物腦組織及體外培養(yǎng)細胞模型中主要炎癥因子腫瘤壞死因子?（tumor necrosis factor?，TNF?）和白細胞介素-1?（interleukin-1?，IL-1?）的表達改變及細胞核因子-κB（nuclear factorκB，NF-κB）信號轉導通路中NF-κB、NF-κB抑制蛋白α（inhibitor of nuclear factorκBα，IκBα）的表達，探討其在慢性氟中毒炎性腦損傷機制中的作用

2、。
　　方法：建立慢性氟中毒動物模型：SD大鼠60只，雌雄各半,隨機分為正常對照組、染氟組（飲水氟含量50 mg/L,加入氟化鈉）2組；實驗期為10個月；氟中毒細胞模型：體外培養(yǎng)THP-1細胞，分為3組，即正常對照組、低劑量染氟組（500?mol/L NaF）、高劑量染氟組（5000?mol/L NaF）。觀察大鼠氟斑牙情況；用氟離子選擇電極法測定大鼠尿氟及骨氟含量；用 Morris水迷宮方法測定大鼠學習記憶能力；光鏡下觀察大鼠腦

3、組織形態(tài)學變化（HE及尼氏染色）；免疫組織化學方法檢測CD11b、膠質(zhì)纖維酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein，GFAP）的表達；酶聯(lián)免疫（Elisa）法檢測TNF?和IL-1?含量；用蛋白印跡（Western Blotting）方法檢測NF-κB p65、IκBα、Phospho-NF-κB p65和Phospho-IκB-α等因子的蛋白表達水平；用CCK8法進行細胞毒性實驗，用流式細胞術檢測染氟后

4、THP-1細胞凋亡情況。對所獲結果作相關統(tǒng)計分析。
　　結果：1.動物實驗：染氟組大鼠出現(xiàn)不同程度的氟斑牙，尿氟和骨氟含量明顯升高；染氟組大鼠第五天逃避潛伏期較對照組顯著延長，空間探索總次數(shù)顯著減少，差異均具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；組織形態(tài)學檢查顯示，各組大鼠腦組織HE染色未見明顯改變，但尼氏染色見染氟組大鼠腦組織神經(jīng)細胞中尼氏小體染色變淺，數(shù)量變少；免疫組化結果顯示，染氟組大鼠腦組織中CD11b及GFAP陽性表達較對照組明

5、顯升高，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；染氟組大鼠腦組織中TNF?和IL-1?含量明顯高于對照組（P＜0.05）；染氟組大鼠腦組織中NF-κB p65及IκBα總蛋白表達均低于對照組（P＜0.05），但Phospho-NF-κB p65和Phospho-IκB-α蛋白表達均高于對照組；相關分析結果顯示，染氟組大鼠腦組織中Phospho-NF-κB p65表達水平與TNF?、IL-1?含量成正比，與IκBα表達成反比。2.體外培養(yǎng)細胞

6、實驗： CCK8細胞毒性結果顯示，用500及5000?mol/L NaF培養(yǎng)細胞24、48及72小時后，500?mol/L NaF及以上濃度可明顯降低 THP-1細胞存活率，呈現(xiàn)存活率與時間和劑量的負相關關系；細胞凋亡率隨著染氟時間的延長逐漸增高；低、高劑量染氟組 THP-1細胞炎癥因子TNF?和IL-1?含量明顯高于對照組（P<0.05）；NF-κB p65、IκBα總蛋白表達均明顯低于對照組（P<0.05），而 Phospho-NF