骨髓間質(zhì)細胞對肺癌骨轉(zhuǎn)移作用的基礎(chǔ)研究和食管癌術(shù)后輔助化療的臨床研究.pdf

1、第一部分骨間質(zhì)細胞對不同骨轉(zhuǎn)移潛能肺癌細胞生物學行為的影響 背景和目的：約20-40％的常見腫瘤患者的骨髓中可檢測到播散的腫瘤細胞，但肺癌、乳腺癌等細胞易在骨中“定居”，直至變成臨床可見的骨轉(zhuǎn)移，而其他常見腫瘤如胃癌腸癌等，骨轉(zhuǎn)移很少見。因此骨間質(zhì)環(huán)境可能在骨轉(zhuǎn)移中扮演一定作用，我們研究骨間質(zhì)細胞對不同骨轉(zhuǎn)移潛能肺癌細胞生物學行為的影響，探討其在肺癌骨轉(zhuǎn)移中的作用。 方法：分別利用骨間質(zhì)細胞培養(yǎng)液(BSC)、骨髓血的上清

2、液(BM)和常規(guī)培養(yǎng)液(RM)處理具有不同骨轉(zhuǎn)移潛能的肺癌細胞株H460、A549和SPC-A1。采用四甲基偶氮唑藍(MTT)法檢測細胞增殖情況，流式細胞儀檢測細胞周期變化及細胞凋亡率。ELISA的方法比較BSC，BM和RM間文獻報道與骨轉(zhuǎn)移相關(guān)因子的濃度差別。 結(jié)果：BSC和BM能明顯增強骨高轉(zhuǎn)移細胞株H460的增殖(BM和BSC，與RM相比，P＜0.05)，而對骨低轉(zhuǎn)移細胞株A549和SPC-A1影響不大(BM和BSC，與R

3、M相比，P＞0.05)。人骨髓血的上清液對很少發(fā)生骨轉(zhuǎn)移的舌癌細胞T8113生長無明顯影響，對胃癌細胞SGC-7901甚至有增殖抑制作用。雙磷酸鹽Zometa(20UM)能阻斷骨髓血上清液對肺癌細胞H460的促增殖作用，而P13K特異性的抑制劑Wortmannin(200nM)無明顯抑制作用。H460細胞經(jīng)BSC和BM處理24小時后，早期凋亡細胞和晚期凋亡/繼發(fā)性壞死細胞的百分比均比RM組明顯降低(P＜0.01)，而細胞周期無明顯差別。

4、ELISA的方法發(fā)現(xiàn)TGF-b，HGF，IGF-1，IL-6和PDGF在BSC，BM，RM組間無明顯差別。 結(jié)論：骨間質(zhì)細胞的分泌液能促進骨高轉(zhuǎn)移細胞株H460的增殖，其機制是通過減少細胞凋亡實現(xiàn)。盡管ELISA的方法未發(fā)現(xiàn)含量特別高的跟腫瘤骨轉(zhuǎn)移相關(guān)的分子，但使用更加靈敏和高通量的研究方法，如雙向凝膠電泳聯(lián)合質(zhì)譜，篩選骨間質(zhì)細胞分泌液中促進骨轉(zhuǎn)移的因子。值得進一步研究。 第二部分使用高通量的技術(shù)平臺研究肺癌細胞與骨基質(zhì)

5、的粘附作用 背景和目的：20％左右的肺癌患者能發(fā)生骨轉(zhuǎn)移，其產(chǎn)生的頑固性疼痛，病理性骨折及脊髓壓迫產(chǎn)生的癱瘓是臨床上的瓶頸問題。肺癌患者中，有的在腫塊很小的時期就發(fā)生骨轉(zhuǎn)移，而有的則一直不發(fā)生骨轉(zhuǎn)移，說明不同類型腫瘤在親骨、定位生長和與骨基質(zhì)粘附方面有明顯差異，而越來越多的證據(jù)顯示，粘附及細胞粘附分子在腫瘤骨轉(zhuǎn)移中起重要作用。 材料和方法：通過粘附實驗，發(fā)現(xiàn)骨高轉(zhuǎn)移細胞株H460在骨間質(zhì)細胞培養(yǎng)(HBS)液包被的器皿上的

6、黏附能力遠遠高于常規(guī)培養(yǎng)液，繼而我們使用基因芯片高通量的技術(shù)平臺研究H460細胞與骨間質(zhì)細胞培養(yǎng)液粘附后是否能調(diào)節(jié)下游基因的改變。 結(jié)果：Microarray證實，細胞株H460在骨間質(zhì)細胞培養(yǎng)(HBS)液包被的器皿上的黏附2小時和24小時后，integrinb3，ADAMTS1等31個基因的表達持續(xù)上調(diào)。這些基因功能集中在細胞一細胞外基質(zhì)黏附和信號轉(zhuǎn)導途徑兩大類。Real-timePCR證實了基因芯片數(shù)據(jù)的可靠性。 結(jié)

7、論：我們的研究提示，骨高轉(zhuǎn)移細胞株H460與骨間質(zhì)細胞培養(yǎng)液的黏附作用能激活某些下游的信號轉(zhuǎn)導途徑和改變黏附相關(guān)分子的表達，這可能是其易于在骨中生存，進而產(chǎn)生骨轉(zhuǎn)移的原因。 第三部分食管癌術(shù)后輔助化療的薈萃分析和來自復旦大學附屬腫瘤醫(yī)院的配對研究 背景和目的：目前關(guān)于食管癌的輔助化療的前瞻性隨機臨床試驗很少，哪個亞組的患者可以最大程度的獲益也不清楚。本研究的目的是通過薈萃分析，并結(jié)合復旦大學附屬腫瘤醫(yī)院的資料，明確食管癌

8、術(shù)后輔助化療的價值。 方法：薈萃分析使用Comprehensivemetar-analysis軟件。配對研究包括1998-2004年在復旦大學附屬腫瘤醫(yī)院接受治療的食管癌患者，其中90名患者接受輔助化療，180名患者未接受化療。采用免疫組化的方法檢測了9個標記物分析預后和預測化療價值。 結(jié)果：共有6項研究，1037例患者納入本薈萃分析，接受輔助化療與無化療組治療效果無顯著性差異，而在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性的亞組患者中，輔助化療顯

9、示了提高生存率的趨勢。來自復旦大學附屬腫瘤醫(yī)院的研究中，對照組和化療組的Ⅰ期患者(P=0.59&P=0.59)、Ⅱ期患者(P=0.2778&P=0.2778)及Ⅲ期患者(P=0.695&P=0.8667)無病生存率和總生存率無顯著性差異?；煂δ[瘤轉(zhuǎn)移至喉返神經(jīng)和(或)腹腔淋巴結(jié)的患者(Ⅳa亞組)最有效。無病生存率和總生存率明顯優(yōu)于未接受化療的患者(P=0.038，0.01)。Bcl-2表達提示預后不良，其在化療組中的表達較無化療組更有