慢性酒精攝入對人和大鼠血清及脂肪組織chemerin水平的影響研究.pdf

1、研究背景:
　　 脂肪組織傳統(tǒng)上被認(rèn)為是能量儲(chǔ)存的場所，并為機(jī)體提供緩沖。然而，現(xiàn)在認(rèn)為脂肪組織是一個(gè)重要的內(nèi)分泌器官。肪組織分為白色脂肪組織和棕色脂肪組織，近年來的研究認(rèn)為白色脂肪組織可以分泌大量具有生物活性的肽類物質(zhì)和蛋白質(zhì)，稱為脂肪因子，其中一些脂肪因子參與調(diào)節(jié)葡萄糖和脂肪代謝及胰島素抵抗，與肥胖及糖尿病的發(fā)生密切相關(guān)。
　　 Chemerin也稱為他扎羅汀誘導(dǎo)基因2及維甲酸受體反應(yīng)元件，以18-kDa的不具活性的

2、前蛋白的形式分泌，經(jīng)過絲氨酸蛋白酶水解C末端后轉(zhuǎn)化為16-kDa的具有生物活性的蛋白質(zhì)。Chemerin在肝臟及白色脂肪組織高表達(dá)，在肺臟、腎臟、垂體、胎盤及卵巢也有表達(dá)。Chemerin做為一種趨化蛋白參與免疫反應(yīng)，近年來認(rèn)為chemerin是一種脂肪因子，chemerin及其受體的表達(dá)在前脂肪細(xì)胞分化為脂肪細(xì)胞的過程中增加，chemerin以自分泌及旁分泌的方式調(diào)節(jié)脂肪分化。近年來研究表明chemerin也與胰島素敏感性密切相關(guān)。到

3、目前為止，大部分的研究證實(shí)chemerin通過不同的作用機(jī)制誘導(dǎo)脂肪組織及骨骼肌的胰島素抵抗。
　　 飲酒是一種與2型糖尿病密切相關(guān)的生活方式。適量飲酒可以通過改善脂代謝、增加胰島素敏感性、減少血小板聚集及減少腹部脂肪含量發(fā)揮保護(hù)作用，而大量飲酒可以影響脂代謝及增加胰島素抵抗，從而導(dǎo)致糖尿病的發(fā)生。目前關(guān)于飲酒對脂肪因子的影響的研究甚少，文獻(xiàn)報(bào)道在慢性酒精中毒患者中瘦素水平以劑量依賴方式升高，而適量酒精攝入明顯升高血漿脂聯(lián)素水平

4、。目前國內(nèi)外關(guān)于飲酒對脂肪因子影響的研究主要是單獨(dú)觀察血清、組織或細(xì)胞中脂肪因子水平的變化，但甚少同時(shí)研究血清及組織脂肪因子含量的變化，也很少探究血清及組織中脂肪因子的相關(guān)性。不同于脂聯(lián)素、抵抗素及內(nèi)脂素等絕大部分由脂肪組織產(chǎn)生的脂肪因子，chemerin在脂肪組織和肝臟均高表達(dá)。目前國內(nèi)外尚無關(guān)于飲酒對chemerin影響的研究，且近年來其他關(guān)于chemerin的研究多單獨(dú)在血清及脂肪細(xì)胞水平進(jìn)行，而缺少同時(shí)對血清及組織chemeri

5、n的研究。因此，本研究的目的是觀察長期不同劑量酒精攝入對人及大鼠血清、脂肪組織及肝臟chemerin的影響，研究chemerin與人各代謝綜合征組分的關(guān)系，并探究酒精對血清chemerin的影響與組織chemerin的關(guān)系。
　　 目的:
　　 1.觀察長期不同劑量酒精攝入對人血清脂肪因子chemerin水平的影響，并研究人血清chemerin水平與血脂、胰島素抵抗指數(shù)及體脂等代謝參數(shù)的關(guān)系。
　　 2.觀察不同

6、劑量酒精攝入對大鼠血清、脂肪組織及肝臟chemerin水平的影響，并研究大鼠血清chemerin和脂肪組織chemerin及肝臟chemerin之間的相關(guān)性。
　　 方法:
　　 1.人體實(shí)驗(yàn)
　　 1.1.實(shí)驗(yàn)對象選擇
　　 從參加山東省立醫(yī)院糖尿病流行病學(xué)調(diào)查的人群中選取148名男性健康飲酒者及55名健康非飲酒者參加實(shí)驗(yàn)。所有受試者體重指數(shù)均小于25kg/m2。每位受試者嚴(yán)格排除糖尿病、急慢性炎癥性疾

7、病、肝臟疾病及肝功異常者、高血壓、心腦血管疾病、腎臟疾病及甲狀腺疾病，所有受試者均未服用影響糖代謝及脂代謝的藥物和影響血壓及體重的藥物。選出的所有受試者年齡均在22-75歲之間，均在本地生活超過5年。
　　 1.2.研究對象分組
　　 所有飲酒者的飲酒時(shí)間均超過3年，飲酒頻率均等于或超過每周兩次。每日酒精攝入量通過每周飲酒次數(shù)乘以每次飲酒量除以7計(jì)算而得。根據(jù)每日飲酒量，飲酒者被分為以下4組:將受試者分為正常對照組（C組

8、）、小劑量飲酒組（L組:酒精量＜15g·d-1）、中劑量飲酒組(M組:酒精量15-47.9g·d-1)及大劑量飲酒組(H組:酒精量≥48g·d-1)。
　　 1.3.人體學(xué)測量
　　 每位受試者在空腹?fàn)顟B(tài)進(jìn)行一次徹底的體格檢查，測量身高、體重、腰圍及臀圍，計(jì)算體重指數(shù)及腰臀比。體脂分析儀測定體脂質(zhì)量、體脂百分?jǐn)?shù)及體脂腰臀比。
　　 1.4.實(shí)驗(yàn)室檢測
　　 空腹血糖用葡萄糖氧化酶法測定?？崭挂葝u素用放免法

9、測定。血脂組分（包括總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇和高密度脂蛋白膽固醇）用常規(guī)酶法測定。用HOMA胰島素抵抗指數(shù)評價(jià)胰島素敏感性，HOMA-IR=空腹胰島素(mU·L-1)×空腹血糖(mmol·L-1)/22.5.血清chemerin用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)測定。
　　 2.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
　　 2.1.動(dòng)物分組及喂養(yǎng)
　　 27只雄性Wistar大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后，完全隨機(jī)分為四組:對照組（C組:蒸

10、餾水5.0g·kg-1·d-1）、小劑量飲酒組（L組:酒精0.5g·kg-1·d-1）、中劑量飲酒組（M組:酒精2.5g·kg-1·d-1）及大劑量飲酒組(H組:酒精5.0g·kg-1·d-1)。酒精和蒸餾水均每日一次由胃管注入，共喂養(yǎng)22周。
　　 2.2.標(biāo)本獲取及存放
　　 大鼠喂養(yǎng)22周后空腹經(jīng)下腔靜脈取血，分離血清置于-80℃保存;快速分離腎周脂肪組織和附睪脂肪組織，分別稱其重量后置于液氮中保存。
　　

11、 2.3.空腹血糖和空腹胰島素測定
　　 葡萄糖氧化酶法測定空腹血糖;放免法測定空腹胰島素;用HOMA胰島素抵抗指數(shù)評價(jià)胰島素敏感性，HOMA-IR=空腹胰島素(mU·L-1)×空腹血糖(mmol·L-1)/22.5.
　　 2.4.脂肪組織及肝臟組織總蛋白的提取
　　 分別剪取液氮保存的脂肪組織及肝臟200mg，放入200μl磷酸鹽緩沖液，超聲破碎勻漿，于-80℃凍存過夜，兩次凍融后離心，吸取脂肪組織勻漿的中間

12、層及肝臟組織勻漿的上層，檢測總蛋白濃度及chemerin含量。
　　 2.5.大鼠血清、肝臟及脂肪組織chemerin含量測定
　　 用ELISA測定大鼠血清、肝臟及脂肪組織chemerin含量。
　　 結(jié)果:
　　 1.人體實(shí)驗(yàn)
　　 1.1.人體學(xué)測量及各代謝指標(biāo)一般情況
　　 校正年齡后大劑量飲酒組體脂質(zhì)量、體脂腰臀比、體脂百分?jǐn)?shù)、甘油三酯、空腹血糖、空腹胰島素和HOMA-IR明顯高

13、于對照組，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 1.2.慢性酒精攝入升高人血清chemerin水平
　　 慢性酒精攝入以劑量依賴方式引起血清chemerin升高。與對照組相比，小劑量飲酒組、中劑量飲酒組及大劑量飲酒組chemerin分別升高9.75％(P=0.265)，13.84％(P=0.094)和40.83％(P＜0.001)。進(jìn)一步校正年齡后，大劑量飲酒組chemerin的升高仍有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.01)。
　　 1

14、.3.血清chemerin水平與甘油三酯、空腹血糖、空腹胰島素及HOMA-IR相關(guān)
　　 相關(guān)分析顯示血清chemerin水平與體重指數(shù)、體脂質(zhì)量、甘油三酯、空腹血糖、空腹胰島素及HOMA-IR正相關(guān)，與高密度脂蛋白膽固醇負(fù)相關(guān)。以血清chemerin作為因變量進(jìn)行多元線性回歸分析，結(jié)果顯示甘油三酯、空腹血糖、空腹胰島素及HOMA-IR是血清chemerin的獨(dú)立影響因素。
　　 2.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
　　 2.1.大劑

15、量酒精攝入引起大鼠體重下降及內(nèi)臟脂肪與體重的比值增加
　　 實(shí)驗(yàn)開始時(shí)各組大鼠體重?zé)o差別，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，與對照組相比，中劑量飲酒組大鼠體重下降5.28％(p＜0.01)，大劑量飲酒組大鼠體重下降6.23％(p＜0.01)。雖然大鼠的體重隨飲酒量增大而下降，但大鼠附睪脂肪組織與體重的比值增加了18.28％(p＜0.01)，而小劑量及中劑量組大鼠上述指標(biāo)變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 2.2.大劑量酒精攝入增加大鼠空腹胰島素及HOM

16、A-IR
　　 隨著酒精劑量增加，空腹胰島素水平及HOMA-IR均升高，大劑量飲酒組空腹胰島素增加48.34％(p＜0.05)，大劑量飲酒組HOMA-IR增加44.04％(p＜0.05)。
　　 2.3.長期酒精攝入升高大鼠血清和內(nèi)臟脂肪組織中chemerin含量
　　 酒精以劑量依賴方式增加大鼠血清和內(nèi)臟脂肪組織中chemerin水平。與對照組相比，小、中、大劑量飲酒組大鼠血清chemerin分別增加了7.96

17、％(p=0.524)、25.33％(p=0.005)、50.60％(p＜0.001)。與對照組相比，小、中、大劑量飲酒組大鼠內(nèi)臟脂肪組織chemerin水平分別升高了13.59％(p=0.357)、34.84％(p=0.025)、50.17％(p=0.002)。與照組相比，小、中、大劑量飲酒組大鼠肝臟chemerin水平分別升高了5.71％(p=0.493)、9.85％(p=0.242)、16.06％(p=0.063)。
　　

18、2.4.血清chemerin水平與內(nèi)臟脂肪組織中chemerin含量正相關(guān)
　　 相關(guān)分析顯示在校正肝臟chemerin含量后，血清chemerin水平和內(nèi)臟脂肪組織中chemerin水平正相關(guān)(r=0.767，p＜0.001)。但校正內(nèi)臟脂肪組織chemerin水平后，血清chemerin水平和肝臟chemerin水平無明顯相關(guān)(r=0.260，p=0.199)。
　　 結(jié)論:
　　 1.慢性酒精攝入以劑量依賴