飲食因素(乙醇和高脂飲食)對大鼠內臟脂肪組織和血清中脂源性因子水平的影響.pdf

1、研究背景：
　　 脂肪組織分白色脂肪組織和棕色脂肪組織，成人絕大部分脂肪組織為白色脂肪組織（大約占體重的20％）。白色脂肪組織(white adipose tissue,WAT)因其可以分泌大量具有廣泛生物活性的肽類物質和蛋白質即脂肪因子，又視其為一個重要的內分泌器官。脂肪因子從其來源分類主要有兩大類：一類來源于脂肪組織和機體的其它組織，如TNF-a,IL-6，PAI-1，主要參與炎癥反應；另一類絕大部分由脂肪組織產生，如lep

2、tin（瘦素）,adiponectin（脂聯(lián)素）,resistin（抵抗素）和visfatin（內脂素）。這些脂源性因子均與糖尿病等代謝綜合征的發(fā)生發(fā)展有密切的關系。Leptin，是參與調節(jié)食物攝入、能量平衡和體重主要的外周內分泌信號，可抑制食物攝入、刺激能量消耗。Adiponectin是具有抗炎、抗糖尿病作用的因子，而resistin則是誘導機體胰島素抵抗、富含半胱氨酸的因子。Visfatin,在小鼠和人的內臟脂肪組織高度表達，具有類

3、胰島素的降血糖作用。Cartonectin則是2001年發(fā)現(xiàn)的一種脂肪組織產生、分泌的因子，與adiponectin是同系物，均屬C1q/TNF-α分子超家族成員，不但具有抗炎作用，而且能誘導體外培養(yǎng)的鼠類脂肪細胞分泌adiponectin和resistin，提示在糖尿病研究領域，是一個具有巨大潛在價值的因子。
　　 乙醇是目前濫用最廣的成癮物質，長期攝入乙醇可以通過抑制胰島素對脂肪細胞的抗脂解作用而增加脂肪組織甘油三酯的分解比

4、率，使循環(huán)游離脂肪酸增加，降低脂肪細胞葡萄糖的吸收，誘發(fā)胰島素抵抗。我們前期研究發(fā)現(xiàn)長期攝入過量乙醇增加骨骼肌Gsa、降低心肌GLUT4表達，從而降低胰島素刺激的糖攝取，增加胰島素抵抗。那么長期攝入乙醇對脂肪因子的影響是怎樣的呢？
　　 目前關于乙醇對脂源性因子影響的研究主要集中在血清中的adiponectin,leptin,resistin。由于研究條件的不同，乙醇對這些因子的影響報道不一。大多數(shù)報道飲酒可以升高血清lepti

5、n、resistin的水平，也有研究指出在乙醇作用下人或動物血清leptin水平降低或不變，適量飲酒并不改變人血清中resistin水平。長期飲酒降低大鼠血循環(huán)adiponectin水平，適量飲酒可以升高受試者血循環(huán)中adiponectin水平。然而，關于乙醇對產生這些因子的組織…脂肪組織的研究甚少。同時，目前乙醇對visfatin，catonectin影響的報道缺乏。
　　 當前長期飲酒和高脂飲食的生活方式已非常普遍，資料顯示

6、無論是長期飲酒還是高脂飲食均影響骨骼肌、心肌的葡萄糖利用，是誘發(fā)胰島素抵抗和2型糖尿病的重要危險因素。目前國內外關于飲酒和高脂飲食對脂肪因子影響的研究主要有以下特點：1.分別觀察飲酒或高脂對脂肪因子的影響，因此無法了解同一研究條件下乙醇和高脂飲食對脂肪因子的影響是否存在不同。2.觀察脂肪因子水平的變化主要集中在血清，缺乏探究脂肪組織中脂肪因子表達含量的變化，因此脂肪因子在脂肪組織與血清中的含量是否存在關聯(lián)尚未完全清楚。
　　 研

7、究目的：
　　 1觀察乙醇對大鼠VAT和血清中脂肪因子adiponectin,leptin,resistin,visfatin,cartonectin水平的影響，并觀察乙醇劑量與各因子水平之間的量效關系。
　　 2分析這五種脂肪因子分別在VAT和血清中水平是否存在相關性，進而推斷是否有可能成為將來糖尿病藥物治療的靶點。
　　 3比較長期攝入乙醇和高脂飲食對大鼠VAT和血清兩個部位脂肪因子adiponectin,r

8、esistin和cartonectin水平的影響。
　　 研究方法：
　　 1動物分組及喂養(yǎng)
　　 分組一：48只SPF級雄性Wistar大鼠(8wk，體重180-200g)，適應性喂養(yǎng)一周，將大鼠按照體重完全隨機分為四組：對照組，低、中、高劑量乙醇組（對應乙醇量：0.5、2.5、5.0g.kg-1·d-1），乙醇(50％，VN)和蒸餾水均于每日晨9:00一次性由胃管灌入，喂養(yǎng)時間22 wk。
　　 分組

9、二：36只SPF級雄性Wistar大鼠（8wk，體重180-2009），適應性喂養(yǎng)一周，將大鼠按照體重完全隨機分為三組（每組12只）：正常飲食組(N組；蒸餾水：5.0g-kg-1·d-1)，乙醇攝入組（HE組；乙醇量：5.0g-kg·1d-1），高脂飲食組(HF組；蒸餾水：5.0g-kg-1·d-1)。乙醇(50％，V/V)和蒸餾水均于每日晨9：00一次性由胃管灌入，喂養(yǎng)時間22 wk。大鼠自由攝食。
　　 2標本獲取及存放食用

10、乙醇攝入第22 wk末，經下腔靜脈取血，離心取上清，分裝，置于-80℃保存；快速分離附睪及腎周脂肪組織，分別稱重后置于液氮中保存。
　　 3空腹血糖和空腹胰島素的測定葡萄糖氧化酶法測定空腹血中葡萄糖含量(FBG)；125I-胰島素放免競爭分析法測定空腹胰島素水平(FINS);用FBGxFlNS/22.5計算胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)，評價機體胰島素敏感性。
　　 4脂肪組織總蛋白的提取取出液氮保存的脂肪組織，置于冰

11、上，用剪刀剪取200mg脂肪組織放入200μl PBS(0.01M PH7.2-7.4)，超聲破碎勻漿，于-80℃凍存過夜；兩次凍容后離心，中層清液為蛋白層。
　　 5酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzyme-linked immunosorbem assay,ELISA）用ELISA測定leptin,adiponectin,resistin,visfatin,cartonectin分別在VAT和血清中的含量。
　　 實驗結果：<

12、br>　　 1長期攝入乙醇和高脂飲食均增加胰島素抵抗指數(shù)。
　　 2長期攝入乙醇升高大鼠VAT和血清中l(wèi)eptin含量。
　　 3長期攝入乙醇降低大鼠VAT和血清中adiponectin含量。
　　 4長期攝入乙醇升高大鼠VAT和血清中resistin含量。
　　 5長期攝入乙醇升高大鼠VAT和血清中visfatin含量。
　　 6長期攝入乙醇降低大鼠VAT中cartonectin含量。

13、　　 7長期攝入乙醇升高血清中TNF-a水平。
　　 8Leptin,adiponectin,resistin,visfatin分別在VAT和血清中的含量存在一定程度的陽性相關。
　　 9長期攝入乙醇和高脂飲食均引起VAT和血清中adiponectin含量顯著下降，且乙醇組比高脂組的含量變化幅度大。
　　 10長期攝入乙醇引起VAT和血清中resistin含量顯著增加，而高脂飲食僅引起VAT中resistin含

14、量顯著下降，血清中尚未發(fā)生顯著變化。
　　 11長期攝入乙醇引起VAT中cartonectin含量顯著下降，血清中未見顯著下降，而高脂組VAT中未見顯著變化，血清中顯著升高。
　　 結論：
　　 1長期攝入乙醇可以引起大鼠VAT和血清中l(wèi)eptin,resistin,visfatin水平升高，adiponectin和cartonectin在VAT中的含量下降，且呈劑量依賴性。
　　 2Adiponecti