2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、【目的】利用已構(gòu)建的真核重組質(zhì)粒 pcDNA3.1(-)/ltB、pcDNA3.1(-)/nspA及pcDNA3.1(-)/ltB-nspA,通過鼻飼途徑免疫BALB/c小鼠,觀察其在小鼠鼻粘膜細胞內(nèi)的表達,檢測其所誘發(fā)的特異性體液免疫應(yīng)答(尤其是粘膜免疫應(yīng)答)和細胞免疫應(yīng)答水平,為研制高效的淋球菌核酸疫苗提供實驗依據(jù)。
  【方法】①真核質(zhì)粒的鑒定。提取真核重組質(zhì)粒 pcDNA3.1(-)/nspA、pcDNA3.1(-)/lt

2、B、pcDNA3.1(-)/ltB-nspA行PCR及雙酶切鑒定。②觀察真核重組質(zhì)粒在小鼠鼻粘膜細胞內(nèi)的表達。真核重組質(zhì)粒 pcDNA3.1(-)/ltB、pcDNA3.1(-)/nspA及pcDNA3.1(-)/ltB-nspA,通過鼻飼途徑免疫BALB/c小鼠,末次免疫后2w取小鼠鼻粘膜采用免疫組織化學(xué)法檢測NspA、LTB、LTB-NspA蛋白的表達。③nspA-ltB核酸疫苗免疫活性的檢測。取真核重組質(zhì)粒 pcDNA3.1(-)

3、/nspA、pcDNA3.1(-)/ltB-nspA鼻飼免疫 BALB/c小鼠,同時設(shè)對照組 pcDNA3.1(-)/ltB、pcDNA3.1(-)和PBS組,共免疫3次。每次免疫前一天及末次免疫后2w經(jīng)小鼠尾靜脈采血,分離血清,間接ELISA法檢測血清中NspA特異性IgG抗體水平;同時用PBS沖洗小鼠生殖道,收集其生殖道沖洗液,間接ELISA法檢測沖洗液中NspA特異性SIgA抗體水平。末次免疫后2w取小鼠脾淋巴細胞于37℃5%CO

4、2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)后,MTT法檢測淋巴細胞增殖水平,間接ELISA法檢測脾淋巴細胞培養(yǎng)上清IFN-γ含量。
  【結(jié)果】真核重組質(zhì)粒 pcDNA3.1(-)/nspA、 pcDNA3.1(-)/ltB和pcDNA3.1(-)/ltB-nspA,經(jīng)鼻飼途徑免疫BALB/c小鼠,末次免疫后2w采用免疫組織化學(xué)法檢測到重組蛋白在小鼠鼻粘膜細胞內(nèi)表達;實驗組 pcDNA3.1(-)/nspA、pcDNA3.1(-)/ltB-nspA小鼠生殖道

5、沖洗液中NspA特異性SIgA水平明顯高于對照組(P<0.01),且含粘膜佐劑的pcDNA3.1(-)/ltB-nspA組較單基因pcDNA3.1(-)/nspA組高(P<0.05)。實驗組小鼠血清中 NspA特異性IgG抗體明顯高于對照組(P<0.01);但pcDNA3.1(-)/ltB-nspA組與單基因pcDNA3.1(-)nspA組比較,特異性IgG抗體水平差異不顯著(P>0.05)。實驗組小鼠脾淋巴細胞經(jīng)特異性NspA抗原刺激

6、后,培養(yǎng)上清中 IFN-γ含量明顯高于對照組(P<0.01)[pcDNA3.1(-)/nspA組達153.79±19.03pg/mL,pcDNA3.1(-)/ltB-nspA組達160.56±25.67pg/mL,與pcDNA3.1(-)/ltB組(60.56±11.45pg/mL),空質(zhì)粒組 pcDNA3.1(-)(40.34±9.89pg/mL)和PBS組(25.75±6.12pg/mL)之間有顯著性差異(P<0.01),兩實驗組間

7、 IFN-γ含量差異不顯著(P>0.05)。MTT法檢測脾淋巴細胞增殖水平, pcDNA3.1(-)/ltB-nspA組和pcDNA3.1(-)/nspA組小鼠脾淋巴細胞經(jīng)特異性NspA抗原刺激后,刺激指數(shù)分別為(1.653±0.32)和(1.598±0.25),明顯高于對照組[pcDNA3.1(-)/ltB組(1.122±0.21),空質(zhì)粒組pcDNA3.1(-)(1.134±0.17)和PBS組(1.014±0.10)(P<0.01

8、)],兩實驗組間刺激指數(shù)差異不顯著(P>0.05)。
  【結(jié)論】
  1、用構(gòu)建好的pcDNA3.1(-)/nspA、pcDNA3.1(-)/ltB-nspA核酸疫苗,通過鼻飼途徑免疫BALB/c小鼠,能夠誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生較強的特異性體液免疫應(yīng)答(尤其是粘膜免疫應(yīng)答)和細胞免疫應(yīng)答。
  2、真核重組質(zhì)粒pcDNA3.1(-)/ltB、pcDNA3.1(-)/nspA及pcDNA3.1(-)/ltB-nspA,通過鼻飼途

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