昆蟲病原線蟲共生菌YL001的分子鑒定及殺蟲毒性基因的克隆.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、昆蟲病原線蟲共生菌是共生于昆蟲病原線蟲(entomopathogeic nematodes,EPNs)腸道內(nèi)的一類細菌,在.EPNs中對昆蟲的致病力起關(guān)鍵性作用,與線蟲之間的關(guān)系可以概括為:線蟲攜帶共生菌進入寄主昆蟲體內(nèi),并釋放到昆蟲的血腔中;共生菌在昆蟲血腔內(nèi)繁殖,產(chǎn)生殺蟲活性極高的蛋白毒素,使昆蟲患敗血癥,一般在48h內(nèi)死亡。由于這類殺蟲毒素蛋白具有高效、殺蟲譜廣和殺蟲迅速等諸多優(yōu)點,從共生菌中克隆殺蟲毒性基因用于開發(fā)新型生物源殺蟲

2、物質(zhì),以延緩害蟲對目前使用的殺蟲物質(zhì)產(chǎn)生的抗性,已成為當今的研究熱點。昆蟲病原線蟲共生菌已成為一類有待開發(fā)的生物資源,基于此,昆蟲病原線蟲共生菌的分類鑒定是開展相關(guān)研究的基礎(chǔ)。 分子鑒定:昆蟲病原線蟲共生菌YL001是西北農(nóng)林科技大學無公害農(nóng)藥研究中心分離得到的一株有較強殺蟲活性的共生菌,其分子鑒定是根據(jù)目前已知16s tDNA基因,設計引物對P<,1>P<,2>,以YL001菌株的總DNA為模板進行PCR擴增,產(chǎn)物大小為568

3、bp, GenBank的接收號為EF206655,此序列與GenBank登錄號為XNl6RNA0的序列相似性達99.5%。構(gòu)建系統(tǒng)進化樹,顯示與.Xenorhabdus nematophilus的親緣關(guān)系最近。昆蟲病原線蟲共生菌YL001與GenBank中現(xiàn)有的昆蟲病原線蟲共生菌同源序列進行比對,與Xenorhabdus nematophilus的相似形高達99.5%,遺傳距離為0.5,進一步證實了該菌株就是.Xenorhabdus n

4、ematophilus。 殺蟲毒性基因的克?。阂訷L001為材料,根據(jù)已報道的殺蟲毒素基因-菌毛蛋白亞基序列,設計引物對P<,3>P<,4>,以YL001菌株的總DNA為模板進行PCR擴增,獲得特異性片斷,并將此片斷克隆到T-easy載體上,獲得了重組子pGEM-PSYL001,序列測定和分析結(jié)果表明,PSYL001閱讀框全長537bp,編碼179個氨基酸,預測分子質(zhì)量和等電點分別為18.9ku和6.94,GenBank的接收號

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