VEGF及其可溶性受體sFlT-1與復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的相關(guān)性研究.pdf

1、研究背景：
　　原因不明復(fù)發(fā)性流產(chǎn)(Unexplained Recurrent Spontaneous Abortion，URSA)是指與同一性伴侶連續(xù)發(fā)生2次或2次以上的自然流產(chǎn)，且不存在染色體、解剖、內(nèi)分泌和自身免疫功能異常以及生殖道感染等病因。URSA的發(fā)生機(jī)制非常復(fù)雜，是婦產(chǎn)科領(lǐng)域一個(gè)很有臨床價(jià)值的研究課題。近年來(lái)研究表明，許多不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的發(fā)生與胎盤(pán)組織中血管增生平衡和胎兒血液供應(yīng)不足有密切關(guān)系，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(

2、vascular endothelial factor，VEGF)是最主要的促進(jìn)血管形成的血管形成增生調(diào)節(jié)因子，在保持蛻膜組織中血管密度、有效血流量和維持胎兒營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)上起重要作用。成功的妊娠依賴(lài)于胎盤(pán)良好的發(fā)育和生長(zhǎng)，在胎盤(pán)植入和胎盤(pán)形成的過(guò)程中，血管的生成對(duì)于成功妊娠是非常關(guān)鍵的。sFlt(Soluble fms-like tyrosine kinase)為血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體的一種，由于它僅有胞外配體結(jié)合區(qū)，保留了與VEGF高親和力

3、的特性，其與VEGF結(jié)合后抑制其促血管生長(zhǎng)作用。sFlt-1在先兆子癇、腫瘤等疾病中的作用已有較多研究成果，但在復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的研究罕見(jiàn)。本研究探討VEGF及sFlt-1與不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)發(fā)病的相關(guān)性及研究VEGF基因多態(tài)性與廣西地區(qū)壯族人群復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的相關(guān)發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，進(jìn)一步闡明URSA發(fā)病機(jī)制，為URSA診治提供理論基礎(chǔ)及治療前景。
　　第一部分、VEGF及其可溶性受體sflt-1與妊娠相關(guān)性研究
　　目的：檢測(cè)正常未孕婦女及

4、正常早孕婦女，不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)未孕婦女及不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)早孕婦女外周血中的sFlt-1及VEGF水平，探討sFlt-1及VEGF與妊娠相關(guān)性;動(dòng)態(tài)檢測(cè)VEGF及sFlt-1在正常孕早期不同孕周外周血濃度，探討sFlt-1及VEGF在孕早期不同孕周的濃度變化。
　　方法：選擇正常未孕婦女、不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)未孕婦女及正常早孕婦女各50例，應(yīng)用ELISA法檢測(cè)各組外周血sFlt-1及VEGF，探討sFlt-1及VEGF與妊娠相關(guān)性

5、。正常妊娠婦女妊娠確診后分別抽取孕4-6周;孕7-8周;9-10周;211-12周外周血，應(yīng)用ELISA法監(jiān)測(cè)不同孕周sFlt-1和VEGF水平濃度，探討sFlt-1及VEGF在孕早期不同孕周濃度變化。
　　結(jié)果：
　　1.不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)未孕組VEGF及sFlt-1水平分別為242.8±236.52026及878.56±837.1065，正常未孕組VEGF及sFlt-1水平分別為253.8277±137.0413及158

6、7.001±1678.2486。兩組VEGF及sFlt-1水平無(wú)顯著性差異，p＞0.05。
　　2.正常早孕組與正常未孕組sFlt-1水平分別為3631.742±3000.0891;1587.001±1678.2486，正常懷孕組sflt水平高于正常未孕組，兩者間差異有顯著性差異(P＜0.01)，;正常早孕組與正常未孕組VEGF水平分別為969.64±696.9974;253.8277±137.0413，正常懷孕組VEGF水平高于

7、正常未孕組，兩者間差異有非常顯著性差異(P＜0.01)。
　　3.正常孕早期，VEGF及sFlt-1在孕4-6周血清濃度高，特別是孕4周(2256.50±1995.09 ng/L;11796.67±9916.08 ng/L)，隨后下降波動(dòng)在一定水平。
　　結(jié)論：
　　VEGF及sFlt-1與妊娠有相關(guān)性，妊娠確診即能檢測(cè)到VEGF、sflt-1的表達(dá)，說(shuō)明在絨毛發(fā)育早期，VEGF及sflt-1即可發(fā)揮作用，對(duì)整個(gè)妊娠進(jìn)

8、行調(diào)節(jié)，妊娠后兩者水平升高;在孕早期，胚胎剛著床滋養(yǎng)細(xì)胞侵入淺，相對(duì)缺氧，導(dǎo)致sFlt-1及VEGF水平升高，VEGF及sFlt-1在孕4-6周血清濃度高，隨著妊娠周數(shù)增加，滋養(yǎng)細(xì)胞逐漸侵入，相對(duì)缺氧現(xiàn)象逐漸改善，sFlt-1及VEGF水平下降至一定水平。
　　第二部分、VEGF及其可溶性受體sflt-1與不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)相關(guān)性研究
　　目的：研究URSA患者中VEGF及其可溶性受體sflt-1血清濃度及在絨毛組織中蛋白及

9、基因表達(dá)情況，探討VEGF及其可溶性受體sflt-1與復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的相關(guān)性。
　　方法：前瞻性觀察1124例不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)再孕患者，有35例URSA組患者胚胎停育，以35例正常早孕行人工流產(chǎn)術(shù)婦女的血清及絨毛作為對(duì)照組，應(yīng)用ELISA法及免疫組織化學(xué)方法觀察35例URSA患者胚胎剛停育（胚胎停育組）血清及絨毛中VEGF及sflt-1的蛋白表達(dá)情況;應(yīng)用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)30例不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者及30例正常早孕婦女絨毛組織中

10、的sFlt-1mRNA及VEGF-mRNA表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1.對(duì)照組外周血中VEGF的水平為982.67±675.47ng/L;URSA組外周血中VEGF的水平為2637.50±2145.09 ng/L.外周血中VEGF水平URSA組較對(duì)照組高，兩者間差異有非常顯著性差異(P＜0.01)。
　　2.對(duì)照組外周血中sFlt-1的水平為3540.67±2989.80 ng/L;URSA組外周血中sFlt-1的水

11、平為13796.67±11917.08 ng/L，外周血中sFlt-1水平URSA組較對(duì)照組高，兩者間差異有非常顯著性差異(P＜0.01)。
　　3.不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)胎停育組絨毛組織中VEGF及sflt-1陽(yáng)性染色(分別為81.25％和84.38％)較正常早孕組（分別為22％和28％）強(qiáng)，URSA組較正常早孕絨毛組織中VEGF及sflt-1蛋白表達(dá)水平高，兩者間差異有顯著性(P＜0.05)。
　　4.不明原因復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)

12、組和正常早孕組絨毛組織中VEGF mRNA及sFlt-1 mRNA表達(dá)的檢測(cè)，不明原因復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)組較正常早孕組絨毛組織中sFlt-1 mRNA表達(dá)高(分別為38.83±2.64及28.53±1.70)，兩者間差異有顯著性差異(P＜0.01);不明原因復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)組較正常早孕組絨毛組織中sFlt-1 mRNA表達(dá)高(分別為38.83±2.64及28.53±1.70)，兩者間差異有顯著性差異(P＜0.01);
　　結(jié)論：

13、　　1.URSA的發(fā)生與VEGF、sflt-1具有相關(guān)性，VEGF、sflt-1的升高導(dǎo)致流產(chǎn)發(fā)生。
　　2.復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)患者血清及絨毛組織可溶性VEGF受體sFlt-1含量升高可能與早孕期滋養(yǎng)層絨毛發(fā)育過(guò)程中缺氧有關(guān)，孕早期缺氧，循環(huán)中sFlt-1的表達(dá)增加，造成循環(huán)中游離態(tài)VEGF水平降低，另外， sFlt-1高表達(dá)會(huì)拮抗VEGF促進(jìn)血管生成的作用，影響滋養(yǎng)細(xì)胞增殖和內(nèi)皮細(xì)胞功能，導(dǎo)致流產(chǎn)發(fā)生。
　　第三部分、VEGF

14、基因多態(tài)性與廣西地區(qū)壯族人群復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的相關(guān)性研究
　　目的：探討血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)-2578C/A、-1154G/A、-634G/C、-460C/T和+936C/T位點(diǎn)單核甘酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphisms，SNP)與廣西地區(qū)壯族URSA人群發(fā)性流產(chǎn)發(fā)病的關(guān)聯(lián)性。
　　方法：應(yīng)用PCR-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)

15、性技術(shù)(PCR-RFLP)檢測(cè)URSA組120例和健康對(duì)照組120例的VEGF5個(gè)SNP位點(diǎn)基因型頻率分布情況。
　　結(jié)果：VEGF-2578C/A、-1154G/A、-634G/C、-460C/T和+936C/T的SNP位點(diǎn)基因型和等位基因頻率分布在病例組和對(duì)照組間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.VEGF-2578C/A、-1154G/A、-634G/C、-460C/T和+936C/T位點(diǎn)的