當歸四逆湯治療硬皮病模型小鼠的實驗研究.pdf

1、　　目的：建立BALB/C小鼠硬皮病模型，研究當歸四逆湯對硬皮病模型小鼠的影響，并探討當歸四逆湯治療硬皮病的作用機理，為臨床治療硬皮病提供理論和實驗依據(jù)。
　　方法：1.動物分組及處理：實驗前剃去小鼠背部中央?yún)^(qū)背毛，并隨機分為 5組，分別為正常對照組(正常組)、模型對照組(模型組)、當歸四逆湯小劑量組、當歸四逆湯中劑量組、當歸四逆湯大劑量組。
　　2.動物造模與用藥：除正常組小鼠背部皮下注射100μl的磷酸鹽緩沖液(

2、PBS)外，其余各組小鼠均背部皮下注射 100μl (200μg/ml)的博來霉素磷酸鹽緩沖液(BLM PBS)，每日1次，連續(xù)3周。造模成功后，大、中、小劑量組給予不同劑量藥物連續(xù)3周，正常組、模型組給予與藥液同體積的生理鹽水。
　　3.指標測定：造模結(jié)束后，觀察皮膚病理學改變，測定皮膚厚度及纖維化指數(shù)、皮膚羥脯氨酸含量、推算皮膚膠原含量、測定皮膚中轉(zhuǎn)化生長因子(TGF-β)、結(jié)締組織生長因子(CTGF)、腫瘤壞死因子(TN

3、F-α)、白介素-10(IL-10)含量。
　　結(jié)果：皮膚病理學改變：肉眼觀察：HE 染色，模型組小鼠皮損處皮膚彈性變差，變厚變硬，背毛未見生長；組織病理可見表皮棘層肥厚，皮下出現(xiàn)大量無定型物質(zhì)；真皮層明顯增厚，膠原纖維明顯增粗、膨大，數(shù)目增多，排列緊密，均質(zhì)化改變；真皮下層血管增粗，血管壁明顯增厚，甚至血管閉塞；毛囊顯著減少；脂肪層變薄、消失，伴有炎癥細胞浸潤。正常組未出現(xiàn)上述改變。用藥組改變較模型組為輕，膠原纖維排列較疏松

4、，真皮層變薄，血管壁較薄，毛囊增加，脂肪層出現(xiàn)，炎性細胞明顯減少，且呈一定的劑量依賴性。
　　模型組皮膚厚度、纖維化指數(shù)、羥脯氨酸、膠原蛋白、CTGF、IL-10、TGF-β、TNF-α的含量均明顯高于正常組(P<0.01)。
　　模型組皮膚厚度明顯大于大、中劑量組(P<0.01)和小劑量組(P<0.05)；纖維化指數(shù)均高于各用藥組(P<0.01)；模型組的皮膚組織中羥脯氨酸及膠原含量也明顯高于大、中劑量組和小劑量組

5、(P<0.01)；模型組CTGF含量高于各用藥組，大、中劑量組(P<0.01)，小劑量(P>0.05)；模型組IL-10含量明顯高于各用藥組(P<0.01)；模型組TGF-β、TNF-α的含量高于各用藥組，均具有顯著意義(P<0.01)。
　　結(jié)論：連續(xù)皮下注射博來霉素可導致小鼠皮膚硬化，符合硬皮病皮膚基本的組織病理學改變，能夠成功誘導硬皮病動物模型。當歸四逆湯能明顯改善模型小鼠皮膚厚度、膠原纖維的增生，與模型組相比具有顯著性