纖維蛋白支架搭載外胚間充質(zhì)源雪旺細(xì)胞移植修復(fù)大鼠脊髓損傷的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:觀察大鼠呼吸黏膜外胚層間充質(zhì)來(lái)源的雪旺細(xì)胞對(duì)脊髓來(lái)源神經(jīng)干細(xì)胞生長(zhǎng)分化的作用及其在損傷脊髓中的遷移情況、組織相容性，評(píng)價(jià)用纖維蛋白膠支架搭載該細(xì)胞用于移植修復(fù)急性胸腰段脊髓損傷的能力。
　　方法:
　　(1)從SD大鼠固有鼻腔中活體剝離鼻黏膜制成黏膜懸液，體外單一化培養(yǎng)并擴(kuò)增其中的外胚層間充質(zhì)干細(xì)胞(ectomesenchymal stem cells，EMSCs)，用雪旺細(xì)胞(schwanncell，SC)誘導(dǎo)培養(yǎng)基

2、將其誘導(dǎo)為類SC細(xì)胞并用dil熒光探針進(jìn)行細(xì)胞膜標(biāo)記。
　　(2)分離提取胚胎鼠的脊髓神經(jīng)干細(xì)胞，與第一步誘導(dǎo)而來(lái)的SCs共培養(yǎng)，觀察大鼠EMSCs源SCs對(duì)脊髓神經(jīng)干細(xì)胞的轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)的影響
　　(3)建立針刺脊髓損傷模型并移植標(biāo)記過的雪旺細(xì)胞，針刺脊髓損傷并移植細(xì)胞后一周，觀察EMSCs源SCs在脊髓組織內(nèi)的生存、凋亡、擴(kuò)增和遷移情況，評(píng)價(jià)其與損傷脊髓組織的相容性及對(duì)損傷環(huán)境的適應(yīng)性。
　　(4)制作T9/10胸腰段脊

3、髓橫斷模型，將健康清潔級(jí)SD大鼠60只完全隨機(jī)分為3組:單純脊髓損傷(SCI)組、單純纖維蛋白膠移植(Fibrin)組和細(xì)胞-支架復(fù)合物移植(F-C)組，術(shù)后每周進(jìn)行BBB運(yùn)動(dòng)行為學(xué)評(píng)分。術(shù)后12周取出損傷段上下脊髓組織，采用HE染色法、免疫組織化學(xué)染色法觀察脊髓橫斷部位神經(jīng)纖維重建和髓鞘再生情況，用和Western Blot免疫印跡檢測(cè)法檢測(cè)神經(jīng)絲蛋白(NF-200)、生長(zhǎng)相關(guān)蛋白-43(GAP-43)和髓鞘堿性蛋白(MBP)含量的相

4、對(duì)變化。
　　結(jié)果:
　　(1) EMSCs來(lái)源的SCs體外生長(zhǎng)、擴(kuò)增狀態(tài)好，免疫熒光結(jié)果顯示其高表達(dá)S100、GFAP、P75、CNpase等雪旺細(xì)胞表面標(biāo)志蛋白。
　　(2)在接觸性共培養(yǎng)狀態(tài)下，大鼠外胚層間充質(zhì)源雪旺細(xì)胞促進(jìn)脊髓神經(jīng)干細(xì)胞分化成神經(jīng)元并促進(jìn)其軸突生長(zhǎng)。
　　(3)針刺注入損傷脊髓的SCs在脊髓組織內(nèi)分化生長(zhǎng)、擴(kuò)增狀態(tài)良好，并沿脊髓長(zhǎng)軸爬行遷移。在損傷脊髓的不適環(huán)境中良好地存活分化。
　

5、　(4)術(shù)后第2周開始至術(shù)后第12周，F(xiàn)-C組大鼠較SCI組大鼠后肢運(yùn)動(dòng)功能有明顯改善，有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05); Fibrin組亦表現(xiàn)某些程度恢復(fù)，但改善程度不顯著;SCI組幾乎未見任何恢復(fù)跡象。HE染色和免疫組化染色結(jié)果顯示:F-C組脊髓斷端可見神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)狀結(jié)構(gòu)跨越斷端兩側(cè)，F(xiàn)ibrin組可見少量神經(jīng)纖維跨越斷端，SCI組脊髓斷端幾乎未見軸突索狀跨越斷端。Western Blot檢測(cè)結(jié)果顯示:生長(zhǎng)相關(guān)蛋白-43(GAP-43)

6、、F-C組神經(jīng)絲蛋白(NF-200)和髓鞘堿性蛋白(MBP)相對(duì)含量均高于Fibrin組和SCI組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　(1)大鼠呼吸黏膜來(lái)源的EMSCs可以成功地在體外條件下培養(yǎng)擴(kuò)增，并誘導(dǎo)為具有雪旺細(xì)胞表型的細(xì)胞。
　　(2) EMSCs源雪旺細(xì)胞在體外與脊髓來(lái)源的神經(jīng)干細(xì)胞共培養(yǎng)可以促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化并促進(jìn)其軸突生長(zhǎng)。
　　(3) EMSCs雪旺細(xì)胞在SD大鼠體內(nèi)能良