轉座子在耐多藥產ESBLs大腸埃希菌中的分布性探討.pdf

1、目的:探討轉座子在耐多藥產ESBLs酶大腸埃希菌中的分布及耐藥相關性。
　　方法:1.初篩試驗:根據美國國家臨床實驗室標準委員會(TheNationalCommitteeforclinicalLaboratoryStandards,NCCLS)推薦的紙片擴散法(kerby-Bauer紙片擴散法)[1]檢測71株大腸埃希菌中頭孢噻肟(CTX)、頭孢他啶(CAZ)、頭孢曲松(CS)、氨曲南(AZT)的耐藥性,即抑菌環(huán)直徑≤22mm的為

2、頭孢他啶;抑菌環(huán)直徑≤25mm的為頭孢曲松;抑菌環(huán)直徑≤27mm的為氨曲南或頭孢噻肟;所符合以上標準的定為初篩可疑產ESBLs菌株。2.紙片確認試(Confirmatorytests)[2]:對紙片擴散法所得可疑ESBLs菌株,同時進行藥敏試驗,每一組藥物中加入頭孢他啶加克拉維酸和頭孢他啶、頭孢噻肟加克拉維酸和頭孢噻肟,觀察在加克拉維酸前后的抑菌環(huán)直徑變化≥5mm可確認為產ESBLs菌株。3.藥敏試驗:采用NCCLS推薦的紙片擴散法(K

3、erby-Bauer法,K-B法)[3],首先采用對大腸埃希菌標準菌株ATCC25922進行質控,再對選定的三類中共6種常用抗菌藥物:頭孢噻肟(CTX)、鏈霉素(S)、阿米卡星(A)、左氧氟沙星(LEV)、環(huán)丙沙星(CIP)、頭孢西丁(F0X)在71株大腸埃希菌耐藥性分別進行測定。4.PCR技術:大腸埃希菌的DNA,采用Biospin細菌基因組DNA試劑盒所提取。根據已知的轉座子Tn21、Tn501、Tnl、Tn2、Tn3、Tnl000

4、、Tn1548分別設計七對引物,在所得到轉座子遺傳標記物為陽性的菌株中以大腸埃希菌DNA為反應模板分別進行PCR擴增,陽性擴增長度分別為:Tn21為317bp;Tn501為373bp;Tnl為497bp;Tn2為479bp;Tn3為323bp;Tn1000為372bp;Tn1548為497bp;將擴增產物進行瓊脂糖凝膠電泳、紫外線檢測儀觀察結果。5.基因測序:分別提取所測轉座子DNA擴增陽性的菌株的PCR擴增產物用核酸定量儀測得DNA濃

5、度>300ug/ml,并送至上海生工生物技術公司進行基因測序[4]。
　　結果:1.產ESBLs菌株:在71株大腸埃希菌中通過紙片法初篩后再行確認試驗,共檢出產ESBLs34株(49.30％)。2.藥敏結果:6種抗生素的敏感性在71株大腸埃希菌中全部分布為:耐多藥45株(63.38%)、雙耐8株(11.27%)、單耐11株(15.49%)、全敏感7株(9.86%)。3.轉座子的檢出情況:71株細菌中含轉座子Tn21、轉座子Tn50

6、1陽性菌共15株,轉座子Tnl、Tn2、Tn3、Tnl000、Tn1548均未檢出。3.1轉座子在不同耐藥模式中的分布:45株耐多藥菌株含耐多藥轉座子菌株13株(28.89%),8株雙耐藥菌株含轉座子雙耐藥菌株1株(12.50%),11株單耐藥菌株含轉座子單耐藥菌株1株(9.09%),7株敏感耐藥模式中未檢出。整體比較CMHX2=4.56p=0.032;耐多藥與(雙耐藥+單耐藥+全敏感)比較X2=4.44p=0.0350。3.2轉座子在

7、產ESBLs酶菌株與非產ESBLs酶中的分布:35株產酶菌含轉座子的14株(40%),36株非產酶菌含轉座子的4株(11.11%);該組X2=10.372p=0.001。3.3不同轉座子模式在各種耐藥模式中的分布:轉座子Tn21檢出7株,其中耐多藥6株(85.71%)、雙耐0株(0%)、單耐1株(12.5%);轉座子Tn501檢出5株,耐多藥4株(80%);雙耐1株(20%)Tn21與Tn501重疊3株(100%),均為耐多藥;3.4不

8、同轉座子模式在產ESBLs酶菌株與非產ESBLs酶中的分布:轉座子Tn21檢出7株,其中產ESBLs酶菌株7株(100%),非產ESBLs酶0(0%)株;轉座子Tn501檢出5株,其中產ESBLs酶菌株1(20%)株,非產ESBLs酶4株(80%);Tn21與Tn501重疊3株,其中產ESBLs酶菌株3株(100%),非產ESBLs酶未檢出;該組整體比較X2=10.909p=0.004,轉座子在產酶菌株中具有統(tǒng)計學意義。3.5轉座子Tn

9、21與Tn501分別在耐藥模式中的分布:轉座子Tn21檢出10株中耐多藥9株(90%)、單耐藥1株(10%)、雙耐藥與全敏模式均為檢出;轉座子Tn501檢出8株中耐多藥7株(87.5%)、雙耐藥1株(12.5%);全敏與單耐模式均未檢出。3.6轉座子Tn21與Tn501分別在ESBLs酶與非產ESBLs酶中的分布:轉座子Tn21檢出10株,產酶10(100%)株、非產酶0株;轉座子Tn501檢出8株,產酶4株(50%)、非產酶4株(50