Dynamin-1敲除小鼠繁殖飼養(yǎng)、基因分型和Dynamin-1對(duì)腎上腺嗜鉻細(xì)胞分泌融合小孔的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、Dynamin，又稱動(dòng)力蛋白或發(fā)動(dòng)蛋白，是一類96kD大小，具有鳥苷三磷酸酶(guanosine triphosphatase, GTPase)活性的蛋白質(zhì)家族。已發(fā)現(xiàn)Dynamin家族廣泛參與真核細(xì)胞泡管狀膜結(jié)構(gòu)的縮緊、閉合與脫離，并參與細(xì)胞骨架再構(gòu)建過程，參與細(xì)胞器的質(zhì)膜運(yùn)轉(zhuǎn)與回收，細(xì)胞囊泡分泌與內(nèi)吞等多重功能。
　　對(duì)于神經(jīng)與神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)，有效回收囊泡并構(gòu)成有序的循環(huán)，是維持神經(jīng)元或神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞正常生理功能的重要環(huán)節(jié)。而

2、主要分布于神經(jīng)與神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)的Dynamin1介導(dǎo)多種內(nèi)吞囊泡與質(zhì)膜離斷，使內(nèi)吞囊泡順利輸送至胞內(nèi)，以維持神經(jīng)元或神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞的正常生理功能。Dynamin1的突變至今被發(fā)現(xiàn)是某些神經(jīng)系統(tǒng)疾病的病因，如：癲癇、神經(jīng)退型性疾病，并可能引起某類腎病綜合癥與腎衰。
　　根據(jù)國(guó)際上觀點(diǎn)與實(shí)驗(yàn)室先前的研究，發(fā)現(xiàn)不論以突變或分子物質(zhì)干擾Dynamin1，不但影響細(xì)胞的內(nèi)吞功能，同時(shí)還影響分泌。耶魯大學(xué)De Camilli實(shí)驗(yàn)室為排除Dyn

3、amin1于內(nèi)吞作用研究中，使用突變或藥物而產(chǎn)生的非特異作用，于2007年構(gòu)建Dynamin1敲除小鼠(Dynamin1 Knockout mice)。目前，利用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物對(duì)Dynamin1于分泌中的效應(yīng)研究仍然闕如，為進(jìn)一步研究Dynamin1于囊泡分泌中的功能，我們引進(jìn)De Camilli實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建的Dynamin1敲除小鼠，進(jìn)行轉(zhuǎn)基因小鼠動(dòng)物模型的基因分型鑒定與照護(hù)傳代，保證遺傳背景一致的條件下改善動(dòng)物質(zhì)量，并利用電化學(xué)、電生理與

4、電鏡方法，觀察腎上腺嗜鉻細(xì)胞Dynamin1對(duì)囊泡分泌的影響。我的研究發(fā)現(xiàn)：
　　1.Dynamin1 KO小鼠胚胎能順利發(fā)育與產(chǎn)出，但隨Dynamin1缺失的影響顯現(xiàn)，于一周內(nèi)死亡。
　　2.Dynamin1 KO小鼠乳鼠體重剛出生時(shí)與同窩其他基因型乳鼠無明顯差異，但隨日齡增加體重?zé)o明顯增長(zhǎng)，于24到48小時(shí)后出現(xiàn)體重輕于同窩野生型與雜合型乳鼠的現(xiàn)象。
　　功能分析方面我和劉斌、吳齊輝(電生理)、王昌河(電鏡)等同學(xué)

5、的合作獲得以下初步成果：
　　3.Dynamin1 KO三天齡乳鼠腎上腺新鮮組織切片柱狀碳纖電極電化學(xué)紀(jì)錄氧化電流較同窩野生型乳鼠增加47.24％。
　　4.Dynamin1 KO三天齡乳鼠腎上腺原代培養(yǎng)嗜鉻細(xì)胞點(diǎn)狀碳纖電極電化學(xué)紀(jì)錄氧化電流幅度較同窩野生型乳鼠增加30%。且在半高寬不變的情況下，氧化信號(hào)峰面積積分隨電流幅度增加變化。
　　5.Dynamin1 KO三天齡乳鼠腎上腺原代培養(yǎng)嗜鉻細(xì)胞與野生型靜息情況與恢復(fù)