黃瓜綠斑駁花葉病毒（CGMMV）的鑒定及分子檢測.pdf

1、黃瓜綠斑駁花葉病毒(Cucumbel-green mottle mosaic Virus，CGMMV)是葫蘆科重要種傳病毒之一，所引起的損失對葫蘆科作物生產(chǎn)影響巨大。該病毒屬我國潛在危險性有害生物，目前口岸植物檢疫部門常有截獲，在國內(nèi)少數(shù)地區(qū)新近發(fā)現(xiàn)。該病毒是通過國際種子貿(mào)易、國內(nèi)的種子調(diào)運進行遠距離傳播。因此，如何快速準確地從進境種子中檢測出該病毒是目前急需解決的問題。本研究開展了CGMMV病毒的鑒定及分子檢測方法研究等工作，為解決該

2、問題提供了借鑒。主要試驗結(jié)果如下： (1) 以廣西南寧一溫室的黃瓜病葉為材料，經(jīng)汁液摩擦接種、透射電鏡觀察、DAS-ELISA和RT-PCR方法，在該溫室黃瓜病葉上檢測到黃瓜綠斑駁花葉病毒(Cucumber green mottle mosaic Virus，CGMMV)。 (2)在對RT-PCR反應體系及擴增程序進行了優(yōu)化的基礎(chǔ)上，建立了免疫捕獲RT-PCR(IC-RT-PCR)的分子檢測方法。我們把該分離物擴增到的C

3、P基因進行T-A克隆，經(jīng)核苷酸序列分析表明，該分離物CP基因全長為486個核苷酸，編碼由161個氨基酸組成、理論分子量為17.3 kDa的蛋白，與國內(nèi)外已報道的CGMMV的CP基因相比，其核苷酸序列的同源性為91.4％～99.4％，其推導的氨基酸同源性為98.8％～100％。 (3)設(shè)計6對引物，擴增經(jīng)莧色藜單個枯斑接種葫蘆病葉的編碼區(qū)核苷酸序列。經(jīng)克隆、測序后，對6段核苷酸序列進行拼接，結(jié)果發(fā)現(xiàn)該分離物的編碼區(qū)全長為6188個