辣椒抗黃瓜花葉病毒（CMV）遺傳分析及ISSR分子標(biāo)記篩選.pdf

1、黃瓜花葉病毒(CMV)是世界上流行最廣和研究較多的植物病毒之一，每年在世界范圍內(nèi)對(duì)辣椒生產(chǎn)造成嚴(yán)重的危害和損失。目前關(guān)于辣椒抗CMV遺傳和分子標(biāo)記篩選的研究報(bào)道較少。本文以Vc16a、SS79與SS69構(gòu)建F<,2>群體，通過對(duì)辣椒CMV遺傳的研究，揭示其遺傳規(guī)律，用ISSR方法篩選辣椒與抗CMV基因連鎖的分子標(biāo)記，為辣椒抗CMv育種提供遺傳學(xué)與分子生物學(xué)的理論依據(jù)。 1．辣椒抗CMV遺傳分析：采用植物數(shù)量性狀單個(gè)世代群體遺傳研

2、究方法，對(duì)F2世代苗期和成株期發(fā)病情況進(jìn)行分析，研究辣椒抗CMV遺傳規(guī)律。辣椒苗期和成株期對(duì)CMV抗性遺傳符合由兩對(duì)主基因控制的模型，但主基因間表現(xiàn)的作用有所不同。在苗期，05CM-8、05CM-9以及05CM-11的遺傳模型都是B-1模型，即主基因間表現(xiàn)為加性-顯性-上位性作用；05CM-10符合B-2模型，即主基因間表現(xiàn)為加性．顯性作用。05CM-8、05CM-10抗CMV主基因遺傳率均為100％；05CM-9和05CM-11抗CM

3、V主基因遺傳率也較高，分別為93.97％、99.33％。在成株期也符合由兩對(duì)主基因控制的模型，但與苗期略有差別：05CM-8與05CM-10的遺傳模型都是B-2模型，05CM-9與05CM-11遺傳模型都是B-1模型。成株期05CM-8抗CMV主基因遺傳率為100％，05CM-10抗CMV主基因遺傳率為95.04％，05CM-9和05CM-11抗cMV主基因遺傳率分別為62.91％和61.32％。 2．辣椒ISSR-PCR體系優(yōu)

4、化：采用4因素3水平[L<,9>(3)<'4>]正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，由：Mg<'2+>、Taq酶、引物和dNTPs組成，對(duì)ISSR-PCR體系進(jìn)行優(yōu)化，獲得最優(yōu)體系：20μL體系中Mg<'2+>為1.5mmol/L、Taq酶1.5U、引物0.6μmol/L、dNTPs200μmol/L， 1×Buffer，50ng模板DNA。 3．辣椒與抗CMV連鎖的ISSR分子標(biāo)記篩選：應(yīng)用BSA-ISSR技術(shù)建立F<,2>代抗感池并篩選抗CMV標(biāo)

5、記。用40個(gè)ISSR引物對(duì)Vc16a和SS69及其F<,2>抗感池進(jìn)行擴(kuò)增，其中I-3、I-10、I-13和I-34這4個(gè)引物在抗感池中擴(kuò)增出具有多態(tài)性條帶。這4個(gè)引物經(jīng)F2代單株驗(yàn)證和連鎖分析，表明引物I-13和I-34篩選出的標(biāo)記存在連鎖關(guān)系，遺傳距離為16.3cM，該特異性片段約為1100bp，命名為I-13<,1100>；I-34與辣椒抗CMV抗病位點(diǎn)連鎖，遺傳距離為27.3cM，該特異性片段約為450bp，命名為I-3<,44