外源性GM-CSF在硬脊膜損傷修復(fù)中的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：通過組織形態(tài)學(xué)觀察、肉眼大體觀察及免疫組織化學(xué)等方法評(píng)價(jià)外源性粒-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)在實(shí)驗(yàn)性硬脊膜損傷修復(fù)過程中所發(fā)揮的作用。
　　方法：硬脊膜損傷實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的制備采用新西蘭大白兔27只，分別行L3椎體全椎板減壓，制造破損面積約為0.2×0.2mm的硬脊膜損傷動(dòng)物模型，將動(dòng)物模型隨機(jī)分為三組，每組9只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：A組：采用自體筋膜進(jìn)行修復(fù)，局部注射生理鹽水0.2ml；B組：采用生理鹽水浸泡后的人工硬脊膜修復(fù)

2、，局部注射生理鹽水0.2ml；C組：采用GM-CSF浸泡后人造硬脊膜修復(fù)，局部注射GM-CSF0.2ml；各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分別于術(shù)后1W、2W、4W各處死3只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，完整取下包括周圍組織及修復(fù)材料在內(nèi)的脊髓節(jié)段長(zhǎng)約2cm，分別行大體肉眼觀察記錄不同時(shí)間段各組硬脊膜修復(fù)過程中存在的差異和周圍瘢痕組織的生長(zhǎng)情況進(jìn)行評(píng)價(jià)；組織形態(tài)學(xué)觀察采用蘇木素-伊紅染色（HE染色)觀察不同炎性細(xì)胞及成纖維細(xì)胞的表達(dá)進(jìn)而評(píng)價(jià)不同處理因素對(duì)硬脊膜損傷修復(fù)過程的影

3、響；免疫組化采用灰度分析對(duì)硬脊膜損傷修復(fù)部位白介素（IL）-1和IL-6在胞漿內(nèi)的陽性表達(dá)大面積進(jìn)行對(duì)比，權(quán)衡各處理因素在硬脊膜損傷修復(fù)過程中作用。
　　結(jié)果：大體肉眼觀察結(jié)果：1W處死的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中，各組硬脊膜修復(fù)程度相當(dāng)，C組周圍肉芽及瘢痕組織生長(zhǎng)較其他兩組旺盛，可觀察到B、C兩組人造脊柱膜與周圍組織粘連較輕易于分離，而A組自體筋膜與周圍組織粘連較嚴(yán)重不易分離；2W處死的各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中A、B兩組周圍肉芽組織及瘢痕生長(zhǎng)情況相當(dāng)，C

4、組肉芽組織及瘢痕生長(zhǎng)生長(zhǎng)情況較前兩組明顯增加，硬脊膜缺損處修復(fù)效果顯著，A組自體筋膜與硬脊膜及周圍組織粘連明顯，界限消失，B、C兩組粘連較輕，易于分離；4W處死的各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中，各組硬脊膜缺損均以修復(fù)，各組修復(fù)部位周圍肉芽組織生長(zhǎng)情況均較前明顯曾多，差異不明顯，但A組粘連明顯，B、C兩組人造硬脊膜與周圍組織粘連輕易于分離。HE染色觀察結(jié)果：對(duì)三組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物標(biāo)本染色涂片，觀察硬脊膜修復(fù)部位粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞及成纖維細(xì)胞的表達(dá)發(fā)現(xiàn)，C組與其他兩

5、組比較存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），可觀察到C組細(xì)胞表達(dá)明顯多于其他兩組，A、B兩組比較未見明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)；免疫組化結(jié)果顯示：三組實(shí)驗(yàn)標(biāo)本中處理因素對(duì)IL-1、IL-6的表達(dá)發(fā)揮主效應(yīng)，其中以C組最為明顯，處理因素與作用時(shí)間二者之間無交互作用。
　　結(jié)論：外源性粒-巨噬細(xì)胞集落刺激因子在硬脊膜損傷修復(fù)過程中能起到趨化、增殖破損硬脊膜周圍炎性細(xì)胞及細(xì)胞因子的表達(dá)，從而縮短硬脊膜損傷的修復(fù)時(shí)間，同時(shí)，GM-CSF促進(jìn)