2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、已有大量的文獻(xiàn)報(bào)道:當(dāng)細(xì)胞惡變或分化時(shí),細(xì)胞糖復(fù)合物上的糖鏈結(jié)構(gòu)常發(fā)生變化,而這種變化來源于某些合成該糖鏈的相應(yīng)的糖基轉(zhuǎn)移酶表達(dá)的改變。?1,3-N-乙酰氨基葡萄糖轉(zhuǎn)移酶(β3 GnTs)家族參于合成其產(chǎn)物中的β1,3-乙酰氨基葡萄糖連接鍵,其中β3GnT-2,-4,-8亞型合成糖蛋白上N-或0-連接型糖鏈中的多聚乙酰氨基乳糖結(jié)構(gòu)。本研究探討這三種酶的表達(dá)和四株白血病細(xì)胞分化間的關(guān)系,以及轉(zhuǎn)錄因子Ets-1對β3GnT-2,-4,-8表

2、達(dá)的調(diào)控。
   本論文分為三個(gè)部分:
   一、β3GnT-2,-4,-8和人急性早幼粒白血病細(xì)胞株HL60及NB4分化的關(guān)系
   目的:研究糖基轉(zhuǎn)移酶β3GnT-2,-4,-8表達(dá)變化和人急性早幼粒白血病細(xì)胞株HL60及NB4分化的關(guān)系。
   方法:RT-PCR檢測β3GnT-2,-4,-8在六種不同白血病細(xì)胞株中的表達(dá)情況。其次,使用ATRA處理HL60和NB4兩種人急性早幼粒白血病細(xì)胞株,使其

3、向粒細(xì)胞方向分化;或用TPA(PMA).處理兩種細(xì)胞株,使其向單核細(xì)胞方向分化。用實(shí)時(shí)定量PCR(Real-time PCR)檢測β3GnT-2,-4,-8的mRNA誘導(dǎo)分化前后在兩個(gè)細(xì)胞株中的表達(dá)變化,并結(jié)合細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察鑒定ATRA、TPA處理前后兩個(gè)細(xì)胞株的形態(tài)變化。
   結(jié)果:β3GnT-2在白血病細(xì)胞株SHI-1,THP-1,K562,HL60,U937,NB4中都有不同程度的表達(dá)。β3GnT-4僅在NB4細(xì)胞中表達(dá)

4、;而β3GnT-8則相反,在NB4細(xì)胞中不表達(dá),而在其它5株細(xì)胞中有不同程度的表達(dá)。在10-7mol/L ATRA或10ng/ml TPA作用2h或3d后,不管HL60和NB4細(xì)胞株向何方向分化,其β3GnT-2,-4,-8的mRNA表達(dá)與不加分化誘導(dǎo)劑的對照組相比均見不同程度的升高。其中以β3GnT-4的改變最為顯著,且有時(shí)間依賴性變化。β3GnT-8和β3GnT-2的上升幅度大致相近。ATRA使HL60和NB4細(xì)胞向粒細(xì)胞分化時(shí),β

5、GnTs的上調(diào)較TPA使兩種細(xì)胞向單核細(xì)胞分化時(shí)明顯:而HL60細(xì)胞的β3GnTs對兩個(gè)分化誘導(dǎo)劑的上調(diào)作用較NB4細(xì)胞更為敏感。
   結(jié)論:早幼粒白血病細(xì)胞HL60和NB4在ATRA或TPA誘導(dǎo)向不同方向分化時(shí),可見β3GnT-2,-4,-8的表達(dá)有不同程度的增加。ATRA的作用強(qiáng)于TPA;而HL60細(xì)胞對分化誘導(dǎo)劑的敏感性強(qiáng)于NB4細(xì)胞。
   二、βGnT-2,-4,-8和人單核白血病細(xì)胞株SHI-1及THP-1

6、分化的關(guān)系
   目的:研究糖基轉(zhuǎn)移酶β3GnT-2,-4,-8表達(dá)變化和人單核白血病細(xì)胞株SHI-1及THP-1分化的關(guān)系。
   方法:在第一部分研究的基礎(chǔ)上,改用人單核白血病細(xì)胞株SHI-1及THP-1為研究對象,用實(shí)時(shí)定量PCR(Real-time PCR)繼續(xù)檢測β3GnT-2,-4,-8的mRNA在ATRA、TPA處理前后兩個(gè)細(xì)胞株中的表達(dá)變化,并結(jié)合細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察鑒定。
   結(jié)果:SHI-1細(xì)胞在

7、10-7mol/LATRA作用2h后,β3GnT-2的mRNA表達(dá)即被下調(diào),但3天后回復(fù);而10ng/ml TPA作用2h或3d后,β3GnT-2均上調(diào),第三天更甚。β3GnT-4在TPA處理SHI-1細(xì)胞3d后,才見上調(diào),其升高程度與β3GnT-2相仿。β3GnT-8在ATRA或TPA處理3d后才見輕度上調(diào)。TI-IP-1細(xì)胞對ATRA、TPA均不敏感,其β3GnT-2,-4,-8的表達(dá)未見明顯改變。與細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化一致。
  

8、 結(jié)論:人單核白血病細(xì)胞株對ATRA及TPA的反應(yīng)均不如人急性早幼粒白血病細(xì)胞株敏感,其β3GnT-2,-4,-8的mRNA表達(dá)變化不明顯。尤其是THP-1細(xì)胞對本文所用濃度的ATRA及TPA都沒有反應(yīng),與細(xì)胞形態(tài)學(xué)不改變相一致。
   三、轉(zhuǎn)錄因子Ets-1對β3GnT-2,-4,-8表達(dá)的調(diào)控研究
   目的:探討白血病細(xì)胞誘導(dǎo)分化過程中Ets-1的表達(dá)及其對糖基轉(zhuǎn)移酶對β3GnT-2,-4,-8的轉(zhuǎn)錄調(diào)控。

9、>   方法:采用Real-time PCR檢測HL60、NB4、SHI和THP-1四種白血病細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄因子Ets-1的mRNA在ATRA或TPA處理后的表達(dá)變化,并進(jìn)一步采用染色質(zhì)免疫沉淀(CHIP)結(jié)合凝膠遷移實(shí)驗(yàn)(EMSA)檢測分析研究前三種細(xì)胞中Ets-1和β3GnT基因DNA的結(jié)合以及Ets-1對β3GnT的轉(zhuǎn)錄調(diào)控。
   結(jié)果:在ATRA或TPA誘導(dǎo)分化下,HL60細(xì)胞中Ets-1 mRNA的表達(dá)均有不同程度的升

10、高,且ATRA的作用似乎強(qiáng)于TPA。相反,NB4細(xì)胞和SHI-1細(xì)胞在ATRA或TPA作用后,總體上,Ets-1的表達(dá)都是下降的。THP-1細(xì)胞Ets-1的表達(dá)基本不變。ChIP檢測發(fā)現(xiàn):各個(gè)β3GnT的基因DNA檢出譜基本上和第一部分用RT-PCR法檢出的β3GnT mRNA的表達(dá)譜一致,結(jié)合EMSA證實(shí)有活化的Ets-I結(jié)合至β3GnT-2或/和β3GnT-8基因DNA片段,但未能檢測到Ets-1對β3GnT-4的表達(dá)調(diào)控。

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