Wnt-5a、β-catenin和APC在結(jié)直腸癌中的表達(dá)與意義.pdf

1、目的: 本課題檢測Wnt-5a在結(jié)直腸癌（CRC）中基因和蛋白水平的表達(dá)，同時(shí)研究Wnt-5a、β-catenin和APC蛋白表達(dá)與其臨床病理因素間的關(guān)系，并分析Wnt-5a與β-catenin、APC表達(dá)的相關(guān)性，嘗試從新的角度對結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展進(jìn)行初步探討，研究Wnt-5a對早期診斷和預(yù)后判斷結(jié)直腸癌的價(jià)值，為今后結(jié)直腸癌的基因治療提供理論依據(jù)。 方法: 收集手術(shù)切除的11例新鮮結(jié)直腸癌（注意避開壞死區(qū)域取

2、材）及相應(yīng)的正常粘膜組織（距癌變邊界10cm外），采用實(shí)時(shí)定量RT-PCR技術(shù)檢測Wnt-5a mRNA的表達(dá)；同時(shí)選取65例結(jié)直腸癌及相應(yīng)癌旁組織、20例腺瘤組織和20例正常結(jié)直腸組織的石蠟標(biāo)本，采用免疫組化SP法檢測Wnt-5a、β-catenin和APC基因蛋白產(chǎn)物的表達(dá)。運(yùn)用配對t檢驗(yàn)、卡方檢驗(yàn)及Spearman等級相關(guān)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果: 實(shí)時(shí)定量RT-PCR結(jié)果 Wnt-5a mRNA在72.7

3、%（8/11例）結(jié)直腸癌組織的表達(dá)高于相應(yīng)正常組織，其在結(jié)直腸癌及相應(yīng)正常組織中表達(dá)的相對含量分別為：0.012317±0.013965和0.000497±0.000739，兩組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=2.768，P=0.02）。 免疫組化染色結(jié)果 （1）Wnt-5a在結(jié)直腸正常組呈弱陽性或陰性胞質(zhì)內(nèi)表達(dá)，在腺瘤組呈彌漫顆粒狀的中等強(qiáng)度陽性表達(dá)，陽性表達(dá)率為80%（16/20例），在癌旁組呈弱陽性或陰性表達(dá)，陽性表達(dá)

4、率為40.0%（26/65例），三組間比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；Wnt-5a蛋白在高中分化CRC中呈中等強(qiáng)度或強(qiáng)陽性表達(dá)，陽性表達(dá)率為58.8%（20/34例），而在低分化CRC則呈明顯下調(diào)的弱陽性或缺失表達(dá)，陽性表達(dá)率為12.9%（4/31例），兩組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.01）。Wnt-5a的表達(dá)與腫瘤組織學(xué)分類有關(guān)（P<0.01），與其它臨床病理指標(biāo)比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。 （2）β-cat

5、enin在結(jié)直腸正常組中100%呈現(xiàn)細(xì)胞膜的線性表達(dá)；在腺瘤組、癌旁組和癌組中出現(xiàn)胞質(zhì)和/或胞核的異常表達(dá)，其陽性表達(dá)率分別為30.0%（6/20例）、16.9%（8/65例）、81.5%（50/65例），四組比較，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.01）；β-cateun在低分化CRC組的異常表達(dá)率（100%（31/31例））明顯高于高、中分化CRC組（64.7%（22/34例））；統(tǒng)計(jì)分析顯示，β-catenin的異常表達(dá)與腫瘤TNM分期、浸

6、潤深度和有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P<0.05），與CRC組織學(xué)分類無關(guān)（P>0.05）。 （3）APC在結(jié)直腸正常組100%呈現(xiàn)胞質(zhì)內(nèi)棕黃色表達(dá)，而在腺瘤、癌旁和癌組則出現(xiàn)胞質(zhì)的缺失表達(dá)，其缺失率分別為10.0%（2/20例）、10.8%（6/65例）、60.0%（39/65例），APC在癌組中的缺失表達(dá)與其它三組比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），在腺瘤和癌旁組的缺失表達(dá)均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。APC的表達(dá)與腫瘤組

7、織學(xué)分類有關(guān)（P<0.05），與腫瘤分化程度、TNM分期、浸潤深度以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況無關(guān)（P>0.05）。 （4）在結(jié)直腸癌組織中，Wnt-5a與β-catenin的異常表達(dá)呈負(fù)相關(guān)關(guān)系（r=-0.350 P=0.005）；在結(jié)直腸腺瘤中Wnt-5a與β-catenin的異常表達(dá)無相關(guān)性（r=0.354，P=0.126）。 （5）在結(jié)直腸癌組織中，Wnt-5a與APC的缺失表達(dá)無相關(guān)性（r=-0.164P=0.203）；

8、在結(jié)直腸腺瘤中，Wnt-5a與APC的缺失表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系（r=0.541 P=0.014）。 （6）在結(jié)直腸癌組織中，APC與β-catenin的異常表達(dá)呈負(fù)相關(guān)關(guān)系（r=-0.275 P=0.031）；在結(jié)直腸腺瘤中，APC與β-catenin的異常表達(dá)有負(fù)相關(guān)趨勢，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。 結(jié)論: （l）Wnt-5a mRNA在結(jié)直腸癌組織中出現(xiàn)較一致的上調(diào)表達(dá)，而Wnt-5a蛋白在高分化癌中明顯的

9、高表達(dá)，在低分化癌中低表達(dá)的現(xiàn)象，可以推測腫瘤對Wnt-5a的調(diào)節(jié)出現(xiàn)在翻譯水平，且Wnt-5a在CRC中可能發(fā)揮腫瘤抑制基因樣作用。其在高分化癌中高表達(dá)，低分化癌中的低表達(dá)是CRC發(fā)生及演進(jìn)過程中的頻發(fā)事件，提示W(wǎng)nt-5a可能是一種結(jié)直腸癌預(yù)后好的標(biāo)志物。 （2）β-catenin在結(jié)直腸腺瘤和CRC中顯示有意義的胞質(zhì)和/或胞核異常表達(dá)，可能參與了結(jié)直腸腫瘤發(fā)生發(fā)展過程，且極有可能發(fā)生在早期。β-catenin蛋白胞質(zhì)和/或

10、胞核的異常表達(dá)與CRC的分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤深度、TNM分期等惡性行為有關(guān)。 （3）APC的缺失表達(dá)是結(jié)直腸腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中的可見改變，其異常表達(dá)可能參與了結(jié)直腸腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程并與腫瘤的組織學(xué)分類有關(guān)。 （4）在CRC中，Wnt-5a與β-catenin的異常表達(dá)呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，提示W(wǎng)nt-5a基因的異?？赡苁前┗颚?catenin異常表達(dá)的原因之一。 （5）在CRC中，Wnt-5a的表達(dá)與APC的表