缺失-重復(fù)突變檢測技術(shù)的評價和診斷策略及一個先天性眼球震顫家系的基因突變檢測.pdf

1、多重連接探針擴增(Multiplexligation-dependentprobeamplificationMLPA)技術(shù)是近年來發(fā)展的一項靈敏度較高的相對定量分析技術(shù)，利用簡單的雜交、連接及PCR擴增反應(yīng)和電泳分離，于單一反應(yīng)管內(nèi)可同時檢測多個不同區(qū)域核昔酸序列的拷貝數(shù)變化。它己成功應(yīng)用于Duchenne型肌營養(yǎng)不良癥(DuchennemusculardystrophyDMD)、亞端粒區(qū)域微缺失及其他基因缺失和重復(fù)導(dǎo)致的智力低下、各類

2、綜合征等疾病的檢測中。本課題引進MLPA技術(shù)用于DMD和威廉斯綜合征(WilliamsBeurensyndrome,WBS)的缺失/重復(fù)檢測，在此基礎(chǔ)上對其進行總結(jié)評價，從而創(chuàng)建了更為簡便的適于中國患者基因檢測的分子診斷策略，使其更易于基層單位的普遍推廣應(yīng)用，獲得更大的臨床應(yīng)用價值。一、Duchenne肌營養(yǎng)不良癥DMD是一種人類常見的致死性X連鎖隱性遺傳的神經(jīng)肌肉系統(tǒng)疾病，發(fā)病率約為活產(chǎn)男嬰的1/3500，約ll3是散發(fā)病例。由于抗肌

3、萎縮蛋白基因突變影響dystrophin蛋白在橫紋肌組織的表達，導(dǎo)致肢體近端骨骼肌進行性萎縮、無力和膝腸肌假性肥大。致病基因DLi，位于Xp21.1-21.3，含79個外顯子。該病發(fā)生的分子基礎(chǔ)包括基因的部分缺失、部分重復(fù)及點突變等微小改變。本文首先對116例DMD患者的MLPA結(jié)果進行了分析評價，并在統(tǒng)計分析前期380例DMD患者的基因缺失突變譜的基礎(chǔ)上，建立了更適合于中國人DMD基因突變檢測的多重PCR新體系“5x2+6”，在普通單

4、位尤其是基層，它可作為DMD基因檢測的首選方案，而MLPA技術(shù)作為補充。兩者的聯(lián)合應(yīng)用旨在建立更加簡便、快速、高效的DMD分子診斷策略。此外，本文亦對中國地區(qū)DMD患者的基因缺失/重復(fù)突變特點進行了詳細而深入的總結(jié)探討。二、威廉斯綜合征威廉斯綜合征是一種少見的遺傳性精神發(fā)育遲滯性疾病，在活產(chǎn)嬰兒中發(fā)病率約為1/10,000-1/20,000。它是由于染色體7q11.23微缺失而導(dǎo)致的一種鄰接基因缺失綜合征，最常見的缺失片段大小為1.SS

5、Mb。該病多為散發(fā)，部分為常染色體顯性遺傳。在基因檢測方面，本課題自行設(shè)計并建立了MLPA技術(shù)平臺，成功對五例臨床疑似WBS患者進行了基因分析，并最終確診。其中一例為父源缺失，其余四例均為母源缺失。在結(jié)果的驗證過程中發(fā)現(xiàn)，WBS缺失關(guān)鍵區(qū)域的短串聯(lián)重復(fù)序列(shorttandemrepeatSTR)在家系分析時總能提供豐富的多態(tài)性信息。因此，本課題首次對這些STR位點在小樣本中進行了多態(tài)性的初步分析，為優(yōu)選DNA標記位點進行WBS的缺失