粒巨細(xì)胞集落刺激因子聯(lián)合異體腫瘤細(xì)胞疫苗治療晚期實體瘤的療效觀察.pdf

1、目的： 探討粒/巨細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)分泌細(xì)胞聯(lián)合異體腫瘤細(xì)胞疫苗治療晚期實體瘤患者的安全可行性和有效性以及對機體免疫狀況的影響。 方法： 患者：選擇我院2007年1月至2008年5月病理診斷明確的IV期癌癥患者共60例，其中男性38例，女性22例，中位年齡47歲(25歲－84歲)，Kps評分：60-80。其中包括，惡性黑色素瘤患者11例，卵巢癌患者10例，腎癌患者15例，胃癌/結(jié)直腸癌患者14例，乳

2、腺癌患者10例。接受腫瘤疫苗治療前一個月未接受放療和/或化療，在患者及家屬知情同意的情況下進行治療，并簽署知情同意書。根據(jù)患者的病理類型在接受治療前培養(yǎng)相應(yīng)腫瘤細(xì)胞系使腫瘤細(xì)胞數(shù)量>6×107，以滿足治療需要，經(jīng)滅活劑滅活使腫瘤細(xì)胞停止分裂增值，液氮保存。以GM-CSF平穩(wěn)表達的A549細(xì)胞為分泌細(xì)胞(由北京博沃德生物技術(shù)有限公司提供)，GM-CSF的分泌量大于1ug/106細(xì)胞/24小時。每次注射前復(fù)蘇異體腫瘤細(xì)胞，并進行無菌檢測確保

3、細(xì)胞未被污染。將這兩種細(xì)胞混合后即刻進行注射，每次皮下注射異體腫瘤細(xì)胞和GM-CSF分泌細(xì)胞混合物1ml，1次/周，共6次。注射部位為取雙上臂內(nèi)測中上1/3處，雙大腿內(nèi)側(cè)中上1/3處，輪流注射。在第1，5次注射同時，在前臂前1/3處內(nèi)側(cè)皮膚進行異體腫瘤細(xì)胞DTH接種。每次注射都要按照《生物治療觀察表》要求項目詳細(xì)記錄DTH反應(yīng)情況、注射部位及全身反應(yīng)情況。在第一次治療前和最后一次治療后取外周血樣10ml應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測：CD4+Th細(xì)

4、胞、CD8+CTL細(xì)胞、CD4+CD25+CD127-(Treg)細(xì)胞、CD3-CD16+56+CD45+(NK)細(xì)胞比例變化情況。應(yīng)用ELISA檢測血清細(xì)胞因子IFN-γ，IL-4，TGF-β1變化情況。完成治療1個月后進行影像學(xué)檢查，進行療效評價。 結(jié)果: 安全性：所有患者均完成治療，無因不良反應(yīng)而停止治療的患者。治療后KPS評分無明顯變化(P>0.05)。治療過程中7/60例患者出現(xiàn)發(fā)熱，都在39度以下，1例出現(xiàn)頭

5、痛頭暈，未治療自行好轉(zhuǎn)。48/60例患者出現(xiàn)紅腫疼痛硬結(jié)，40/60例瘙癢，2/60例出現(xiàn)水泡。未發(fā)現(xiàn)疫苗相關(guān)的自身免疫反應(yīng)，未發(fā)現(xiàn)其他 治療結(jié)束一個月后評價，無完全緩解(CR)和部分緩解病例(PR)，1例死亡，4例至少有一處腫瘤縮小但未達到部分緩解(MR)；16例進展，胃/結(jié)直腸癌10例，惡性黑色素瘤、乳腺癌各2例，卵巢癌、腎癌各1例：其中包括原有肝轉(zhuǎn)移10例，腦轉(zhuǎn)移2例，肺轉(zhuǎn)移1例患者，其他部位轉(zhuǎn)移3例；40例穩(wěn)定，腎癌12

6、例，惡性黑色素瘤、卵巢癌各9例，乳腺癌8例，胃/結(jié)直腸癌2例。隨訪至2008年6月30日因疾病進展(PD)死亡8例，其中6例肝轉(zhuǎn)移，1例腦轉(zhuǎn)移。治療后有5例病情穩(wěn)定(SD)超過9周。4例生存超過1年，其中惡性黑色素瘤2例，胃/結(jié)直腸癌2例。中位總生存時間5.5個月。 因為完整的腫瘤細(xì)胞是多價免疫原性，采用國際通用的評價標(biāo)準(zhǔn)以DTH接種部位的紅腫硬結(jié)最大直徑作為評價標(biāo)準(zhǔn)。第1次接種12M0例DTH陽性，第5次接種44/60例DTH

7、陽性，其中MR患者2例，16例進展患者中有3例DTH陽性；40例穩(wěn)定患者中有34例DTH陽性。穩(wěn)定和進展患者的局部反應(yīng)程度和DTH反應(yīng)程度都有明顯差異(Z=243 P=0.000，Z=3.499 p=0.000)。試驗還觀察到穩(wěn)定和進展患者的DTH陽性率有明顯差異(P<0.005)，且DTH反應(yīng)程度也有明顯差異(P<0.001)，試驗表明穩(wěn)定患者的DTH反應(yīng)程度及陽性率明顯強于進展患者，并且DTH反應(yīng)程度和局部反應(yīng)程度線性相關(guān)(R2=0

8、.594，P<0.001)。各病種DTH陽性反應(yīng)情況，惡性黑色素瘤8/11例陽性、卵巢癌7/10例陽性、腎癌12/15例陽性、乳腺癌7/10、胃結(jié)直腸癌7/14例陽性。局部反應(yīng)程度和臨床療效之間也有一致性。2例局部反應(yīng)4級的胃/結(jié)直腸癌患者，病情有所好轉(zhuǎn)。 治療后TGF-β1在惡性黑色素瘤和腎癌明顯降低(P<0.05)。CD8+T細(xì)胞在治療后的惡性黑色素瘤、卵巢癌、腎癌明顯升高(P<0.05)。Treg細(xì)胞在治療后的所有患者都明