子宮內(nèi)膜漿液性癌潛在性癌前病變及其應(yīng)用研究.pdf

1、近年來(lái)，子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)，約占女性生殖道惡性腫瘤的20％～30％，子宮內(nèi)膜癌分Ⅰ、Ⅱ型已被廣泛接受。自從Zheng等于2004年首次報(bào)道子宮內(nèi)膜異型增生（EmGD）作為可能的子宮內(nèi)膜漿液性癌（ESC）的癌前病變之后，人們對(duì)于ESC發(fā)生發(fā)展的認(rèn)識(shí)已有不少進(jìn)展。ESC約占子宮內(nèi)膜癌的10％～15％，但是相對(duì)于占絕大部分的子宮內(nèi)膜樣癌來(lái)說(shuō)，ESC有著很高的病死率。 從分子水平來(lái)說(shuō)，子宮內(nèi)膜漿液性癌在早期就產(chǎn)生了許多信號(hào)

2、通路變化。在多達(dá)96％的病例中，p53基因發(fā)生突變，并且大多伴有p53蛋白過(guò)表達(dá)。在形態(tài)學(xué)上，有證據(jù)表明EmGD是子宮內(nèi)膜漿液性癌在形態(tài)學(xué)上可識(shí)別的癌前病變。我們認(rèn)為子宮內(nèi)膜上皮內(nèi)癌（EIC）或者其他的同義詞應(yīng)僅作為形態(tài)描述用語(yǔ)，而不用于病理學(xué)上診斷術(shù)語(yǔ)。如果考慮到子宮外病變，單發(fā)的子宮內(nèi)膜上皮內(nèi)癌類似無(wú)肌層侵潤(rùn)的子宮內(nèi)膜漿液性癌，并且子宮內(nèi)膜上皮內(nèi)癌患者也應(yīng)當(dāng)按照子宮內(nèi)膜漿液性癌進(jìn)行治療。形態(tài)正常而p53免疫反應(yīng)陽(yáng)性的子宮內(nèi)膜細(xì)胞（p

3、53印記細(xì)胞）在統(tǒng)計(jì)學(xué)上與子宮內(nèi)膜漿液性癌高度相關(guān)，很大一部分都有p53基因的突變，并且很可能是一系列病變的開(kāi)端，形成一個(gè)由p53印記到EmGD，到子宮內(nèi)膜上皮內(nèi)癌或局部子宮內(nèi)膜漿液性癌，最終發(fā)展為侵襲性子宮內(nèi)膜漿液性癌的發(fā)病模式。因此形態(tài)學(xué)上可以識(shí)別的癌前病變對(duì)子宮內(nèi)膜漿液性癌的早期診斷和減少死亡率有著重要的意義。 宮頸細(xì)胞學(xué)檢查篩查宮頸病變是腫瘤防治學(xué)上最成功的發(fā)明之一，且不斷完善的篩查技術(shù)使宮頸癌的發(fā)病率大大降低。但是，迄

4、今為止，子宮內(nèi)膜病變的診斷仍主要依賴于分段診刮術(shù)，尚無(wú)一項(xiàng)成熟的技術(shù)應(yīng)用于子宮內(nèi)膜病變的大面積人群篩查。近年來(lái)，宮腔細(xì)胞學(xué)檢查在篩查子宮內(nèi)膜病變方面有很好的預(yù)警性及發(fā)展前景。因此，將p53與宮腔細(xì)胞學(xué)相結(jié)合來(lái)篩查子宮內(nèi)膜病變將會(huì)為ESC的早期診斷提供廣闊的前景。 基于此，本課題的研究?jī)?nèi)容包括以下兩部分： 第一部分:子宮內(nèi)膜漿液性癌的p53印記研究 背景和目的：子宮內(nèi)膜癌是女性生殖系統(tǒng)常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，其中子宮內(nèi)

5、膜漿液性癌（ESC）約占10％～15％，但是相對(duì)于占絕大部分的子宮內(nèi)膜樣癌來(lái)說(shuō)，ESC有著很高的病死率。p53的改變不僅存在于ESC中，也存在于ESC的早期病變（子宮內(nèi)膜上皮內(nèi)癌，EIC）和癌前病變（子宮內(nèi)膜異型增生，EmGD）中。最近我們?cè)谘芯恐邪l(fā)現(xiàn)一些形態(tài)學(xué)上沒(méi)有任何不典型性的內(nèi)膜腺體或腺上皮在p53染色后出現(xiàn)強(qiáng)陽(yáng)性的現(xiàn)象，我們將其定義為p53印記。在本研究中，我們著重分析這些p53印記和ESC的關(guān)系，以及其作為ESC“潛在性”癌前

6、病變的依據(jù)。 材料和方法：我們用免疫組織化學(xué)的方法分析了182例子宮標(biāo)本的p53印記，其中62例子宮內(nèi)膜漿液性癌作為實(shí)驗(yàn)組，子宮內(nèi)膜樣癌和良性子宮各60例作為對(duì)照組。從中選取126個(gè)樣本進(jìn)行激光顯微切割并測(cè)序，從而分析p53基因，其中包括38個(gè)p53印記樣本以及其他一些取自漿液性癌和對(duì)照組的樣本。 結(jié)果：p53印記與子宮內(nèi)膜漿液性癌高度相關(guān)，并且常見(jiàn)于漿液性癌病灶附近的形態(tài)正常的子宮內(nèi)膜中，而在鄰近子宮內(nèi)膜樣癌的組織和正

7、常的子宮組織中則少見(jiàn)。42％的p53印記樣本顯示至少有一處p53基因的突變，從8例漿液性癌的子宮中獲取的p53樣本都有不同程度的突變，其中4例發(fā)現(xiàn)在p53印記細(xì)胞、癌前病變（EmGD）和腫瘤病灶區(qū)（ESC/EIC）中至少有一處完全一致的p53基因突變。 結(jié)論：p53基因突變出現(xiàn)于病變子宮內(nèi)膜細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變之前，在子宮內(nèi)膜p53印記、癌前病變和子宮內(nèi)膜漿液性癌/上皮內(nèi)癌（ESC/EIC）中發(fā)現(xiàn)一致的p53基因突變并存在線性關(guān)系，說(shuō)

8、明存在p53印記現(xiàn)象的內(nèi)膜細(xì)胞可能是ESC的潛在性癌前病變，p53印記可用于ESC的早期診斷。 第二部分:子宮內(nèi)膜漿液性癌p53蛋白篩查方法的初步研究 背景和目的：近年來(lái)，子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)，約占女性生殖道惡性腫瘤的20％～30％，其中子宮內(nèi)膜漿液性癌（ESC）約占子宮內(nèi)膜癌的10％～15％，但是相對(duì)于占絕大部分的子宮內(nèi)膜樣癌來(lái)說(shuō)，漿液性癌有著很高的病死率。目前國(guó)內(nèi)外很多學(xué)者認(rèn)為富腔細(xì)胞學(xué)檢查在篩查子宮內(nèi)膜

9、病變方面有很好的預(yù)警性及發(fā)展前景，而p53印記與ESC有非常密切的關(guān)系，因此，我們將p53印記檢測(cè)與宮腔細(xì)胞學(xué)結(jié)合起來(lái)，尋求一種更為精確的ESC早期診斷方法。 材料和方法：將不同比例的Ⅱ型子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株SPEC-2（p53陽(yáng)性）和Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株Ishikawa（p53陰性）相混合，研究用Western Blot及ELISA等方法能檢測(cè)出p53蛋白的最低閾值。并將Western Blot方法試用于臨床標(biāo)本，將無(wú)創(chuàng)性子宮內(nèi)膜

10、細(xì)胞采集器采集的內(nèi)膜細(xì)胞進(jìn)行p53蛋白檢測(cè)，觀測(cè)其靈敏度和準(zhǔn)確率。 結(jié)果：用Western Blot單獨(dú)檢測(cè)SPEC-2細(xì)胞株的p53蛋白時(shí)，最少需要1～2×104個(gè)細(xì)胞才能出現(xiàn)條帶，而這些細(xì)胞最多與2×106個(gè)Ishikawa細(xì)胞相混合時(shí)條帶尚可見(jiàn)。用ELISA檢測(cè)靈敏度則較高，單獨(dú)檢測(cè)時(shí)最少需要SPEC-2細(xì)胞1～2×103個(gè)，但背景值較高。 結(jié)論：應(yīng)用子宮內(nèi)膜細(xì)胞采集器采集子宮內(nèi)膜細(xì)胞，結(jié)合p53印記進(jìn)行子宮內(nèi)膜細(xì)