MITF導(dǎo)致Waardenburg綜合征的果蠅模型研究.pdf

1、目的:在課題組前期對(duì)國(guó)人WS患者進(jìn)行突變篩查及致病基因功能研究的基礎(chǔ)上，利用Mitf RNA干擾果蠅模型，觀察果蠅表型及壽命變化，并利用表達(dá)譜芯片篩選MitfRNAi時(shí)果蠅Wg/Wnt通路上表達(dá)量異常的基因，在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)水平探索Mitf基因通過(guò)影響Wg/Wnt通路而導(dǎo)致WS的作用機(jī)制。
　　方法:1、利用果蠅GAL4-UAS系統(tǒng)，觀察MitfRNA干擾果蠅的表型變化:將UAS-Mitf RNAi雄果蠅果蠅（實(shí)驗(yàn)組）和w1118雄果蠅

2、果蠅（對(duì)照組）分別與elav-GAL4、ey-GAL4、DA-GAL4處女雌果蠅雜交，觀察子代果蠅表型變化;2、觀察雜交所得各組果蠅壽命變化:在實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組與各GAL4品系雜交得到的子代果蠅中，分別取健康雄果蠅，在相同條件下培養(yǎng)，統(tǒng)計(jì)其死亡時(shí)間和個(gè)體數(shù)，計(jì)算其最高壽限（90％死亡時(shí)間），半數(shù)死亡時(shí)間，繪制壽命曲線;3、利用Affymertrix GeneChip(R) Drosophila Genome2.0 Array果蠅表達(dá)譜芯片

3、篩選缺陷表型果蠅Wg/Wnt通路上表達(dá)量異常的基因。
　　結(jié)果:1、實(shí)驗(yàn)組Mitf RNAi＞ey-GAL4子代果蠅眼睛均較對(duì)照組w1118＞ey-GAL4子代果蠅眼睛變小，無(wú)明顯性別差異;實(shí)驗(yàn)組MitfRNAi＞elav-GAL4子代果蠅全部出現(xiàn)殘翅表型，而對(duì)照組w1118＞elav-GAL4子代全部翅膀發(fā)育正常;實(shí)驗(yàn)組Mitf RNAi＞DA-GAL4子代果蠅與對(duì)照組Mitf RNAi＞DA-GAL4子代果蠅相比，未見(jiàn)明顯表型

4、變化;2、實(shí)驗(yàn)組果蠅和對(duì)照組存活時(shí)間沒(méi)有明顯差異(p＞0.05)，實(shí)驗(yàn)組果蠅較對(duì)照組半數(shù)死亡時(shí)間略有提前，最高壽限略短;3、通過(guò)分析表達(dá)譜芯片數(shù)據(jù)，發(fā)現(xiàn)在殘翅果蠅Wg/Wnt通路上有15個(gè)基因表達(dá)量異常，其中上調(diào)的基因有4個(gè)，分別為Wnt6，Apc，wdb，fz2;下調(diào)的基因有11個(gè)，分別為:CkIIbeta2，Pka-C2，CG15800，Roc1b, Ssl,Ste12DOR,skpF,sinah,skpD,CG32568,Apc2

5、。
　　結(jié)論:1、Mitf RNAi果蠅與ey-GAL4果蠅雜交出現(xiàn)小眼表型及Mitf單獨(dú)作用對(duì)果蠅壽命影響不顯著與哺乳動(dòng)物WS模型一致，進(jìn)一步證實(shí)了Mitf不僅在基因序列上與脊椎動(dòng)物有高度保守性，在基因功能上也有一定的保守性;2、Mitf RNAi果蠅與elav-GAL4果蠅雜交子代出現(xiàn)殘翅表型，與臨床上WS3和WS4表型類似，不僅提示了Mitf可能通過(guò)某種機(jī)制調(diào)控Wnt通路的功能，也說(shuō)明利用果蠅來(lái)研究WS是可行的;3、在Mit