何首烏對糖尿病的骨形態(tài)成分變化及BMP-2、TGF-β1、IGF-Ⅰ的表達研究.pdf

1、研究目的：
　　第一從臨床觀察何首烏湯劑對糖尿病性骨質(zhì)疏松癥患者的療效分析。第二建立糖尿病性骨質(zhì)疏松大鼠模型，從形態(tài)學、病理學、超微病理學、分子生物學四個層面觀察糖尿病性大鼠骨的動態(tài)變化情況，了解何首烏對糖尿病性大鼠模型骨的形態(tài)及成分的影響。
　　研究方法：
　　實驗一：隨機選取臨床50例糖尿病性骨質(zhì)疏松患者，分為2組（A組基礎(chǔ)治療組B組何首烏組）每組25例患者，對A組行基礎(chǔ)治療結(jié)合胰島素控制血糖治療，B組在基礎(chǔ)治療和

2、胰島素控制血糖的基礎(chǔ)上加用何首烏口服治療。分別在第0周、4周、8周、12周觀察其血清鈣（S-Ca）、血清磷（S-P）、堿性磷酸酶、骨鈣素、骨密度變化及臨床VAS、QOL、SF-MPQ、麻木評分。
　　實驗二：取100只大鼠,分空白對照組20只（A組）其余80只大鼠行STZ法8周后造成糖尿病性骨質(zhì)疏松大鼠模型，選取成功成模大鼠60只隨機分為3組：糖尿病組20只（B組）、胰島素組20只（C組）、何首烏組20只（D組）。各組實驗動物予以

3、相應的干預后，分別于第0、8、12、16周檢測：體重、血糖、糖化血紅蛋白、血脂、骨密度、血清磷（S-P）、血清鈣（S-Ca）、堿性磷酸酶、骨鈣素；于第12、16周分批處死，檢測HE染色、掃描電鏡分析。
　　實驗三：于第12、16周觀察糖尿病SD大鼠BMP-2、TGF-β1、IGF-Ⅰ在大鼠骨組織中的免疫組化及Westernblot表達情況，并用不同軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析。
　　研究結(jié)果：
　　實驗一:
　　1、

4、兩組患者治療前后VAS評分比較：B組（何首烏治療組）患者治療后VAS評分12周比治療前0周及4周明顯升高（P<0.05）；組間相比，B組（何首烏治療組）在治療后12周的VAS評分較A組（基礎(chǔ)治療組）明顯升高（P<0.05）。
　　2、兩組患者治療前后QOL評分比較：B組（何首烏治療組）患者治療后12周QOL評分均較治療前0周和4周明顯升高（P<0.05）,A組（基礎(chǔ)治療組）QOL評分12周比0周差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;組

5、間相比，B組（何首烏治療組）在治療后12周的QOL評分較A組（基礎(chǔ)治療組）明顯升高（P<0.05）。
　　3、兩組患者治療前后SF-MPQ評分比較：B組（何首烏治療組）患者8周和12周與0周和4周相比SF-MPQ評分均顯著降低，差異均具明顯統(tǒng)計學差異（P<0.05），A組（基礎(chǔ)治療組）患者12周 SF-MPQ評分與0周相比和12周相比差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；而組間比較，B組（何首烏治療組）與A組（基礎(chǔ)治療組）相比較，SF

6、-MPQ評分在12周后具有統(tǒng)計學差異（P<0.05），說明B組治療對疼痛改善程度要優(yōu)于A組。
　　4、兩組患者在治療前后末梢皮膚麻木的情況比較：B組（何首烏治療組）患者8周、12周麻木程度與0周、4周相比均有顯著性差異（P<0.05），A組（基礎(chǔ)治療組）患者12周麻木程度與0周相比和4周相比差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；兩組間比較，B組（何首烏治療組）在治療后12周的麻木評分較A組（基礎(chǔ)治療組）有顯著性（P

7、>　　5、兩組疾病療效比較：兩組治療后12周疾病療效比較,基礎(chǔ)治療組25例,顯效5例（20.00％）,有效11例（44.00%）,無效9例（36.00%）,總有效率64.00%。何首烏治療組25例,顯效8例（32.00%）,有效13例（52.00%）,無效4例（16.00%）,總有效率84.00%。治療總有效率優(yōu)于對照組,有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。
　　6、糖化血紅蛋白測定結(jié)果：第8、12周糖化血紅蛋白測定結(jié)果顯示B組（何首烏

8、組）中患者與0周和4周相比有統(tǒng)計學意義（P﹤0.05），在第12周A組（基礎(chǔ)治療組）中患者與0周相比有統(tǒng)計學意義（P﹤0.05）；其余各組無明顯統(tǒng)計學意義。
　　7、治療前后兩組血鈣，磷變化及鈣磷乘積變化：兩組患者血鈣在治療前均在正常范圍。兩組患者血鈣在治療前及治療后均正常，差異亦無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；兩組患者血磷在治療前及治療后均正常，差異亦無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；鈣磷乘積:差異亦無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。

9、r>　　8、血清AKP（堿性磷酸酶）：B組血清AKP（堿性磷酸酶）含量在第12周和8周與0周相比，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。A組血清AKP（堿性磷酸酶）在第12周與0周相比，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。其余各組無統(tǒng)計學意義。
　　9、血清BGP（骨鈣素）：B組血清BGP含量在第12周和8周與0周相比，差異有統(tǒng)計學意義P<0.05。A組血清BGP含量在第12周與0周相比，差異有統(tǒng)計學意義P<0.05。其余各組無統(tǒng)計學意

10、義。
　　10、骨密度測定：差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。
　　實驗二:
　　1、一般情況
　　1.1平均體重測量:在第16周糖尿病組B組與空白對照組A組、胰島素組C組、何首烏組D組相比，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　1.2血糖測量,在第8周糖尿病組（B組）、胰島素組（C組）、何首烏組（D組）與空白對照組（A組）相比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。在第12、16周糖尿病組（B組）與空白對

11、照組（A組）、胰島素組（C組）、何首烏組（D組）相比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　1.3糖化血紅蛋白測定：第16周糖尿病組（B組）與空白對照組（A組）和何首烏組（D組）相比，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。組內(nèi)比較糖尿病組（B組）第16周與0周相比，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　2、血脂代謝情況
　　測定血清總膽固醇、甘油三脂、HDL-C和LDL第8周空白對照組與胰島素組、何首烏組、糖尿病組比

12、較，差異有統(tǒng)計學意義P<0.05；第12周空白對照組、何首烏組與糖尿病組比較，差異有統(tǒng)計學意義 P<0.05。第16周空白對照組、胰島素組、何首烏組與糖尿病組比較，差異有統(tǒng)計學意義P<0.05。糖尿病組第16周與0周相比，差異有統(tǒng)計學意義P<0.05。
　　3、相關(guān)生化指標檢測
　　血清Ca含量：第16周糖尿病組（B組）與胰島素組（C組）、空白對照組（A組）和何首烏組（D組）比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；組間比較，

13、糖尿病組（B組）第16周與0周比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　血清P含量：在各個時間段組間和組內(nèi)相比較均無明顯統(tǒng)計學意義（P>0.05）。鈣磷乘積：第16周糖尿病組與與空白對照組（A組）和何首烏組（D組）比較均降低有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；而組間比較鈣磷乘積糖尿病組第16周較第0周降低有統(tǒng)計學意義（P<0.05），其余各組間在各個時間段比較均無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。
　　血AKP（堿性磷酸酶）含量變化

14、：第8周空白對照組（A組）與糖尿病組（B組）、胰島素組（C組）和何首烏組（D組）比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。而第16周糖尿病組（B組）與胰島素組（C組）、空白對照組（A組）和何首烏組（D組）比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。糖尿病組（B組）第16周和12周與0周比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）
　　血清BGP（骨鈣素）含量變化：第8周空白對照組（A組）與糖尿病組（B組）、胰島素組（C組）和何首烏組（D組）比

15、較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。而第16周糖尿病組（B組）與胰島素組（C組）、空白對照組（A組）和何首烏組（D組）比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。糖尿病組（B組）、胰島素組（C組）和何首烏組（D組）第8周與0周比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），糖尿病組（B組）第16周與0周比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　4、雙能X線：腰椎、髖部骨密度測定，第8周空白對照組（A組）與糖尿病組（B組）、胰島素組（C組

16、）和何首烏組（D組）比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。糖尿病組（B組）第16周與0周比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。第16周糖尿病組（B組）與胰島素組（C組）、空白對照組（A組）和何首烏組（D組）比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。糖尿病組（B組）、胰島素組（C組）和何首烏組（D組）第8周與0周比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　5、骨組織光鏡觀察：空白對照組：第12、16周：骨小梁均勻，骨細胞清晰，骨

17、陷窩正常，骨細胞核規(guī)則，核排列靠陷窩中間（中央型）。糖尿病組第12周：骨細胞減少，可見骨細胞核固縮，骨小梁變細，排列稍紊亂，骨細胞核不規(guī)則，可見三角形、桿狀、彎月行，核排列靠陷窩邊緣（周圍型）。第16周：骨細胞進一步減少，部分骨細胞核固縮，骨小梁變細，排列紊亂，骨細胞核不規(guī)則，有三角形、桿狀、彎月行，核排列靠陷窩邊緣（周圍型）。胰島素組第12周：骨細胞減少，骨細胞部分核固縮，較多空骨陷窩，周圍的鞘增厚，骨小管減少且短，骨小梁稍變細，排列

18、紊亂，骨細胞核不規(guī)則，有三角形、桿狀、彎月行，核排列靠陷窩邊緣（周圍型）;第16周與空白對照組16周相似。何首烏組第12周：骨小梁均勻粗細相等，排列規(guī)則，骨細胞較清晰，骨陷窩數(shù)量正常，骨細胞核規(guī)則，核排列靠陷窩中間（中央型）；何首烏組：第16周同空白對照組16周。
　　6、電鏡觀察：空白對照組：第12周16周股骨頸的骨小梁均勻粗細相等，排列非常規(guī)則，骨小梁之間的間隙很小，表面光滑。糖尿病組：第12周大鼠股骨頸的骨密質(zhì)較薄，骨小梁排

19、列不規(guī)則且變細，骨小梁互相連接成疏松的立體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)有增多，較大的骨小梁之間的間隙，表面稍粗糙。第16周骨小梁表面的膠原纖維排列雜亂、松散，空骨陷窩數(shù)量逐漸增加，空骨陷窩周圍的鞘增厚，骨小管變短且數(shù)量減少，表面粗糙。胰島素治療組與何首烏治療組：第12周大鼠股骨頸的骨密質(zhì)較薄，骨小梁排列不規(guī)則骨小梁互相連接成疏松的立體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)有增多，稍大的骨小梁之間的間隙，表面稍粗糙。胰島素治療組第16周大鼠股骨頸的骨密質(zhì)變厚，骨小梁基本均勻粗細大致相等，

20、排列基本規(guī)則，骨小梁的立體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)有增加，較大的骨小梁之間的間隙，表面較光滑。何首烏治療組第16周與空白對照組相似。
　　實驗三:
　　免疫組化和免疫印跡法實驗結(jié)果顯示糖尿病組16周 BMP-2、TGF-β1、IGF-Ⅰ含量明顯低于其余各組有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;第12周空白對照組與其余3組相比有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;何首烏組BMP-2、TGF-β1、IGF-Ⅰ含量16周與12周相比升高，差異明顯有統(tǒng)計學意義（P

21、<0.O5）。
　　結(jié)論：
　　1、何首烏治療糖尿病性骨質(zhì)疏松患者,可以改善患者的臨床癥狀。
　　2、何首烏對于糖尿病性骨質(zhì)疏松癥患者,可以使糖化血紅蛋白穩(wěn)定，BGP和AKP血中含量下降,并且沒有明顯副作用。
　　3、何首烏對DOP大鼠模型可以改善血糖、糖化血紅蛋白
　　4、何首烏對DOP大鼠模型可以血鈣恢復正常,穩(wěn)定 AKP、BGP,使骨密度增加。
　　5、何首烏可以改善DOP大鼠模型紊亂的血脂。<