花粉管通道法遺傳轉(zhuǎn)化小麥與變異株的醇溶蛋白分析.pdf

1、小麥?zhǔn)俏覈匾募Z食作物之一.常用的小麥育種方法有基因槍法、農(nóng)桿菌介導(dǎo)法、花粉管通道法.花粉管通道轉(zhuǎn)化法以其操作簡單、轉(zhuǎn)化率高等優(yōu)點正在被廣泛使用,通過此方法,目前已培育出許多具有抗逆性基因的小麥植株. 本實驗以燕麥、六倍體小黑麥、谷子、玉米、抗旱性較強的小麥品種以及質(zhì)粒PBI 1301為供體,采用不去雄和去雄兩種花粉管通道轉(zhuǎn)化法對普通小麥植株進行轉(zhuǎn)化,擬通過選擇,培育抗旱性提高的小麥材料. 1.轉(zhuǎn)化體系的建立.2005

2、年的實驗材料采用不去雄的花粉管通道轉(zhuǎn)化法,測得其平均結(jié)實率為43.9﹪,平均成株率為56.0﹪;2006年的實驗材料采用去雄的花粉管通道轉(zhuǎn)化法,測得其平均結(jié)實率為65.5﹪,平均成株率為73.6﹪.采用不去雄的轉(zhuǎn)化法將PBI 1301轉(zhuǎn)入受體小麥1145中.分別提取Mo代18株植株幼苗葉片DNA進行PCR檢測,其中編號15的植株呈陽性,進一步對其Ml代進行PCR及GUS組織化學(xué)染色檢測,均呈陰性且無瞬時表達.這表明Mo代中的PBI 13

3、01并未遺傳到下一代中.2006年采用去雄的方法轉(zhuǎn)化,在供體中含有PBI 1301的實驗組合中,對其幼葉進行GUS組織化學(xué)染色.檢測到編號為12-2(凡1/1301)、25-3(凡3/1301)、36-3(溫19/谷子+1301)的植株葉片產(chǎn)生瞬時表達(出現(xiàn)藍色斑點).為進一步驗證,提取該三株的葉片DNA進行PCR檢測,結(jié)果呈陽性.綜合以上結(jié)果,去雄法轉(zhuǎn)化效果較好、具有明顯的優(yōu)勢. 2.變異株的醇溶蛋白分析.花粉管通道轉(zhuǎn)化后代中