靶向survivin基因治療人肝細胞癌的相關研究.pdf

1、第三軍醫(yī)大學博士學位論文靶向survivin基因治療人肝細胞癌的相關研究姓名：陳濤申請學位級別：博士專業(yè)：普通外科（肝膽）指導教師：田伏洲2002.5.1反義寡核瞢酸抑制肝癌細胞生長的作用機制及其相關信號轉導途徑。結果l l 、4 8 例肝癌組織中有3 1 例s u r v i v i n 蛋白表達陽性，陽性率6 4 ．6 ％。S u r v i v i n 在肝癌組織中的表達與腫瘤分化程度有關，與其余臨床病理特征無關。在E d m o

2、 n d s o n 分級I ～Ⅱ級患者其表達顯著低于Ⅲ～Ⅳ級患者。2 、肝癌組織中s u r v i v i n 表達與細胞增殖凋亡比有關，s u r v i v i n 表達陰性者肝癌細胞增殖凋亡比顯著低于表達陽性者。S u r v i v i n 表達陰性患者與表達陽性者比較，其一年生存率無顯著差異，但三年生存率顯著高于后者。3 、脂質體介導s u r v i v i n 反義寡核苷酸轉染人肝癌S M M C ．7 7 2 1 細

3、胞后，細胞內s u r v i v i n 蛋白及m R N A 表達顯著降低：同時細胞貼壁率顯著降低，細胞生長明顯受抑制，生長抑制率最高可達7 1 ．8 2 ％，至轉染后一周仍可維持一定的生長抑制作用。4 、透射電鏡觀察可見轉染后細胞超微結構呈凋亡樣改變，如染色質濃縮、斷裂及凋亡小體形成等。激光共聚焦顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)轉染后細胞骨架微絲系統(tǒng)發(fā)生了劇烈的變化，微絲失去了其均勻致密排列有序的結構，或發(fā)生斷裂，其平均熒光強度顯著降低。5 、流式

4、細胞儀檢測見轉染后細胞凋亡顯著增加，并出現(xiàn)G 2 ／M 期阻滯現(xiàn)象。R T ．P C R 檢測發(fā)現(xiàn)轉染后細胞內c y c l i n B l m R N A 含量顯著增加。6 、正常7 7 2 1 細胞中p 3 8 M A P K 和c a s p a s e ．3 有一定量的基礎表達，但其活性很低，s u r v i v i n 反義寡核苷酸轉染對其表達無明顯影響，但轉染后p 3 8 M A P K 及c a s p a s e ．3

5、 活性均顯著升高，其中p 3 8 M A P K 活性升高發(fā)生于c a s p a s c - 3 活性升高之前，應用特異性p 3 8 M A P K 活性抑制荊S B 2 0 2 1 9 0 作用后可以顯著抑制p 3 8 M A P K 及c a s p a s e 一3 的活性。結論：1 、s u r v i v i n 在肝癌組織中的表達具有普遍性，其表達與E d m o n d s o n 分級及肝癌細胞增殖凋亡比有關，s u

6、r v i v i n 的表達對促進肝癌細胞增殖、抑制其凋亡具有重要作用，同時s u r v i v i n 的表達也可作為預后不良的重要指標。2 、脂質體介導轉染針對s u r v i v i n m R N A 啟動子區(qū)的反義寡核苷酸可在蛋白及m R N A 兩個水平上有效地降低肝癌S M M C - 7 7 2 1 細胞內s u r v i v i n 的表達，并能夠有效抑制肝癌細胞的增殖活性，s u r v i v i n 可以