肝癌發(fā)生中MEF2對HDACs的調(diào)控及HDACI丙戊酸聯(lián)合順鉑對肝癌細(xì)胞的增殖抑制研究.pdf

1、研究目的：
　　 本研究應(yīng)用實時熒光定量PCR(Real-timePCR)法測定大鼠在誘導(dǎo)肝癌發(fā)生發(fā)展過程中,肝臟組織中MEF2A/2C及HDAC4/10的mRNA表達(dá)水平,考察MEF2A/2C與HDAC4/10mRNA表達(dá)的相關(guān)性。然后通過MTT法探討丙戊酸(VPA)聯(lián)合順鉑(DDP)對人肝癌細(xì)胞HepG2、BEL7404、SMMC7721的增殖抑制作用。通過計算聯(lián)合用藥的抑制率,進(jìn)一步評價兩藥物對肝癌細(xì)胞是否具有協(xié)同作用。<

2、br>　　 材料與方法：
　　 采用0.01％二乙基亞硝胺飼喂Wistar大鼠,建立大鼠肝癌模型,分別于4、8、12、16、18周后斷頸處死,每批8-10只;空白組為10只,給純凈水自由飲用,按相同時間處死,每批2只,取肝臟標(biāo)本,保存于-80℃冰箱。提取大鼠肝組織中的總RNA并逆轉(zhuǎn)錄為cDNA,應(yīng)用Real-timePCR檢測組織中MEF2A/2C與HDAC4/10mRNA表達(dá)量。然后采用三組不同濃度的VPA與三組不同濃度的D

3、DP及九組聯(lián)合用藥組作用于人肝癌細(xì)胞HepG2、BEL7404、SMMC7721,24、48、72h后,觀察細(xì)胞數(shù)量和形態(tài)的變化,用MTT法分析藥物對細(xì)胞增殖的抑制率(IR),計算聯(lián)合用藥對細(xì)胞增殖抑制率q值,考察聯(lián)合使用是否為協(xié)同作用。
　　 結(jié)果：
　　 18周以后,大鼠致癌率為100%,總死亡率為35%,MEF2A/2CmRNA在第4、8周的樣本中表達(dá)量大量增加(P＜0.01),HDAC4/10mRNA在第4周的樣

4、本中也大量表達(dá)(P＜0.01),隨后都逐漸趨于正常水平。但兩者的mRNA表達(dá)水平在時間上不存在相關(guān)性。
　　 72h后,各用藥組細(xì)胞數(shù)目減少十分明顯,其中VPA+DDP組較單獨用藥組減少更為顯著,其細(xì)胞形態(tài)發(fā)生較大改變。采用MTT比色法顯示,對照組細(xì)胞生長率明顯高于各實驗組,聯(lián)合用藥組對細(xì)胞增殖的抑制率(IR)更為顯著,且隨著藥物濃度增加及作用時間延長,各組對細(xì)胞增殖IR明顯增加。根據(jù)q值結(jié)果,在VPA較高濃度(≥1001μ·m