粘膜相關(guān)淋巴組織淋巴瘤分子病理診斷與臨床研究.pdf

1、目的:粘膜相關(guān)淋巴組織淋巴瘤（簡稱MALT淋巴瘤）是發(fā)病率僅次于彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤和濾泡性淋巴瘤的非霍奇金B(yǎng)細(xì)胞淋巴瘤。病因?qū)W研究證實其發(fā)病與感染引起的慢性炎癥或自身免疫性疾病密切相關(guān)。腫瘤細(xì)胞在組織學(xué)上呈現(xiàn)小淋巴細(xì)胞形態(tài)，缺乏典型的形態(tài)學(xué)特征和特異性免疫組化表型，目前以排除性診斷為主要鑒別方法；而形態(tài)學(xué)上介于重度炎癥與早期MALT淋巴瘤之間的病例，更是臨床病理診斷工作中的難點(diǎn)。由于MALT淋巴瘤本身存在免疫球蛋白基因克隆性重排及特有的

2、遺傳學(xué)異常，包括t(11;18)(q21;q21)、t(1;14)(p22;q32)、t(14;18)(q32;q21)等，通過分子病理學(xué)技術(shù)進(jìn)行檢測，不僅能夠輔助這一類型淋巴瘤的診斷，而且是臨床治療方案選擇的主要依據(jù)，從而改變以往對于MALT淋巴瘤存在盲目過度治療的狀態(tài)。因此，本研究以不同部位原發(fā)的MALT淋巴瘤病例為研究對象，擬在FFPET上建立穩(wěn)定的檢測IGH基因重排的PCR技術(shù)和染色體易位的熒光原位技術(shù)，一方面用于MALT淋巴瘤

3、的診斷及鑒別診斷，另一方面為臨床合理治療及判斷預(yù)后提供科學(xué)的依據(jù)。
　　 方法:選擇94例MALT淋巴瘤,4例淋巴組織增生性病變及10例重度胃炎病例。第一部分:應(yīng)用BIOMED-2標(biāo)準(zhǔn)化引物體系檢測58例，包括44例MALT淋巴瘤、4例淋巴組織反應(yīng)性增生性病變和10例重度慢性炎癥病例IGH基因克隆性重排;從而評估該方法在MALT淋巴瘤的診斷和鑒別診斷中的應(yīng)用價值;第二部分:應(yīng)用熒光原位雜交技術(shù)(FISH)在FFPET上檢測45例

4、不同部位原發(fā)的MALT淋巴瘤染色體易位t(11;18)(q21;q21)和t(14;18)(q32;q21);通過免疫組織化學(xué)方法，觀察MALT1和BCL10兩個蛋白在MALT淋巴瘤組織中的表達(dá)，分析MALT1的表達(dá)水平及BCL10在細(xì)胞內(nèi)定位表達(dá)與特異性染色體易位之間的相關(guān)性，并結(jié)合臨床病史及隨訪資料，總結(jié)不同部位原發(fā)MALT淋巴瘤的臨床病理特征及預(yù)后相關(guān)因素。
　　 結(jié)果:1、本研究58例樣本，經(jīng)DNA質(zhì)控引物檢測后可用于模

5、板擴(kuò)增的37例（包括23例MALT淋巴瘤,4例淋巴組織反應(yīng)性增生和10例重度胃炎），18例MALT淋巴瘤和2例反應(yīng)增生性病變檢測到IGH單克隆重排，敏感性為78.3％(18/23)，10例重度炎癥和2例反應(yīng)性增生病變均未檢測出IGH基因呈單克隆性重排，特異性為85.7%(12/14)。VH-FR1、VH-FR2、VH-FR33個引物管組合應(yīng)用對IGH單克隆性重排的檢出率明顯高于單獨(dú)及任意兩個引物管組合(P＜0.05)。
　　 2

6、、45例石蠟包埋組織樣品經(jīng)FISH檢測（包括41例MALT淋巴瘤，1例DLBCL，1例B細(xì)胞來源的非霍奇金淋巴瘤，2例淋巴組織增生）均獲得滿意的信號。6例MALT淋巴瘤(胃和肺各3例)MALT1基因斷裂(14.6%，6/41),3例t(11;18)(q21;q21)陽性(14.3%,3/21);5例MALT淋巴瘤（4例腸道和1例眼附屬器）檢出18號染色體非整倍體(45.5%,5/11);1例甲狀腺原發(fā)MALT淋巴瘤IGH和MALT1基因

7、拷貝數(shù)增加，但未檢測出t(14;18)(q32;q21);1例甲狀腺和1例乳腺M(fèi)ALT淋巴瘤檢測出IGH基因斷裂，但未發(fā)生t(14;18)(q32;q21)。
　　 3、92例MALT淋巴瘤免疫組化染色檢測MALT1和BCL10的表達(dá)，18例表現(xiàn)為MALT1蛋白強(qiáng)表達(dá)，29例表現(xiàn)為中等強(qiáng)度的胞漿表達(dá),46例(50.0%)呈現(xiàn)弱陽性或陰性表達(dá);40例(43.5%)BCL10染色細(xì)胞漿和細(xì)胞核同時表達(dá),32例呈現(xiàn)細(xì)胞核陽性，15例呈

8、現(xiàn)胞漿陽性，另有5例不表達(dá)BCL10抗體。MALT1的表達(dá)在染色體異常組與正常組中存在差別(P＜0.05)，即MALT1蛋白在染色體異常的MALT淋巴瘤病例組中的表達(dá)水平高于染色體異常組;而BCL10的表達(dá)模式在兩組間無差別(P＞0.05)。
　　 4、87例臨床隨訪資料完整的MALT淋巴瘤按照Ann-Arbor臨床分期:ⅠE期57例，ⅡE期18例，ⅢE期1例，ⅣE期11例。ⅠE期和ⅡE期5年生存率分別為89.4%和81.4%，

9、ⅢE、ⅣE期5年生存率為61.1%。臨床分期、胃腸道原發(fā)腫瘤侵犯的深度、治療方案、是否累及淋巴結(jié)外其他器官以及IPI評分是影響患者生存率的主要因素(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:在石蠟包埋組織上，IGH基因克隆性重排檢測和熒光原位雜交技術(shù)均可用來輔助MALT淋巴瘤的診斷及鑒別診斷。PCR方法在鑒別早期MALT淋巴瘤和反應(yīng)性病變中較FISH技術(shù)靈敏度更高，但FISH檢測出染色體異常的陽性結(jié)果特異性較強(qiáng)，對于輔助診斷和指導(dǎo)治療有很高