重組病毒TMVSc1754在敏感性煙草上引發(fā)的過敏性反應的研究.pdf

1、煙草花葉病毒(tobacco mosaic virus，TMV)是一種桿狀的正鏈RNA病毒。野生型TMV可以系統(tǒng)地感染敏感性煙草N.tabacum cv．Samsun nn并產(chǎn)生典型的花葉癥狀。但是，重組病毒TMVSc1754卻能在敏感性煙草上引發(fā)枯斑反應。對多個過敏性反應(Hypersensitive response，HR)標志性基因進行檢測發(fā)現(xiàn)，在這個過程中它們的表達都不同程度上調(diào)。與此同時，多個精胺響應性的基因也受誘導表達。并且

2、精胺合成途徑關(guān)鍵酶抑制劑MGBG可以大大遏制這個枯斑反應。由此推測，TMVSc1754是經(jīng)由精胺信號通路在敏感性煙草上引發(fā)HR反應的。 為了確定這個HR過程中的激發(fā)子，構(gòu)建了一系列的突變病毒。結(jié)果表明，煙草花葉病毒外殼蛋白(coat protein，CP)C末端的6個氨基酸缺失不會在敏感煙草上引發(fā)枯斑反應，重組病毒RNA也不能直接引發(fā)HR反應，只有病毒RNA編碼的重組CP蛋白才能引發(fā)這個HR反應。 將Sc1754CP和增

3、強型綠色熒光蛋白(enhance green nuorescent protein，EGFP)融合，插入到真核表達載體pBI121中，通過基因槍轟擊的方法轉(zhuǎn)化洋蔥表皮細胞。細胞定位實驗發(fā)現(xiàn)，Sc1754CP主要定位在細胞外周的細胞膜或細胞壁上。 利用原核表達技術(shù)，在大腸桿菌中大量表達了Sc1754CP等重組CP蛋白，并通過免疫家兔的方法制備了多克隆抗體。隨后經(jīng)過交叉吸附的方法，最終得到了特異性的抗Sc1754CP多克隆抗體和抗T