凝集素樣氧化低脂蛋白受體1在心肌細(xì)胞氧化應(yīng)激時的表達(dá).pdf

1、目的：通過原代培養(yǎng)SD大鼠乳鼠的心肌細(xì)胞，給予過氧化氫建立心肌細(xì)胞氧化應(yīng)激的模型，探討氧化應(yīng)激時凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體1在心肌細(xì)胞上的表達(dá)。
　　方法：
　　1.原代心肌細(xì)胞培養(yǎng)：采用酶消化法、差速貼壁和化學(xué)試劑抑制發(fā)培養(yǎng)原代心肌細(xì)胞，倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞生長，免疫熒光法鑒定心肌細(xì)胞中α-肌動蛋白來鑒定心肌細(xì)胞。
　　2.試驗分組：選用培養(yǎng)72-96h心肌細(xì)胞隨即分為正常對照組和H2O2（100umol/l、2

2、00umol/l、300umol/l）干預(yù)組。
　　3.氧化應(yīng)激模型鑒定：通過化學(xué)比色法檢測乳酸脫氫酶釋放量，流式細(xì)胞術(shù)檢測心肌細(xì)胞凋亡率鑒定氧化應(yīng)激模型。
　　4.通過RT-PCR和Westernblotting檢測心肌細(xì)胞氧化低密度脂蛋白受體1mRNA和蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1：經(jīng)免疫組織化學(xué)法鑒定細(xì)胞為心肌細(xì)胞，且細(xì)胞純度可達(dá)95％以上。
　　2：與正常對照組比較，各H2O2處理組培養(yǎng)液中乳酸脫

3、氫酶釋放量增加，細(xì)胞凋亡率明顯增加，差別有統(tǒng)計學(xué)意義，并且隨著H2O2濃度增加，乳酸脫氫酶釋放量和晚期凋亡率增加，各組差別有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　3：與正常對照組比較，各H2O2處理組LOX-1mRNA和蛋白表達(dá)量增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，并且隨著H2O2濃度增加，LOX-1mRNA和蛋白表達(dá)量增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)論：
　　1：通過H2O2可以誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡。
　　2：在正常心肌細(xì)胞中LOX-1微量表達(dá)。